[发明专利]一种犬嗜吞噬细胞无形体P44重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种犬嗜吞噬细胞无形体P44重组蛋白，属于动物病毒抗体检测领域。所述重组蛋白包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列或由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。本发明还进一步公开了所述重组蛋白的基因，包含所述基因的载体和宿主细胞，以及所述重组蛋白的其制备方法和在检测犬嗜吞噬细胞无形体的抗体中应用。利用本发明的重组蛋白检测犬嗜吞噬细胞无形体抗体，方便快捷，灵敏度高，与其他病原体无交叉反应，特异性强，具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于动物病毒抗体检测领域，具体地，涉及一种犬嗜吞噬细胞无形体P44重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

犬嗜吞噬细胞无形体病(Anaplasma phagocytophilum)是由蜱作为传播媒介引起的血液病原菌，其所致疾病为经蜱传播的人兽共患病，由侵染动物末梢血中性粒细胞引起，动物患该病表现出的临床特征为发热、全身不适、食欲减退、乏力等类似流感样症状。

目前临床中较为直接的诊断方法为血涂片染色法，间接荧光抗体试验(Indirectfluorescence antibody，IFA)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked immunosorbentassay，ELISA)等免疫学方法，此外PCR(聚合酶链式反应)法也是一种常用于嗜吞噬细胞无形体的诊断，是用于诊断嗜吞噬细胞无形体病最为敏感和特异性较高的检测方法。但是上述的免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)技术等方法需要使用指定的仪器设备、具备相应的试验条件和技能，难以在基层推广。

嗜吞噬细胞无形体抗体检测方面，目前国内外研究的主要方向均是使用一小部分蛋白序列进行检测抗体，这种情况势必有漏检的风险。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种犬嗜吞噬细胞无形体P44重组蛋白，包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

在本发明中，重组蛋白也叫融合蛋白或重组融合蛋白，是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。

P44蛋白是犬嗜吞噬细胞无形体主要的免疫原蛋白，可诱发和启动机体免疫系统产生免疫应答。本发明将P44蛋白全长序列进行抗体检测，不仅能够提高诊断的灵敏度，还能减少与其他病原体的交叉反应。

在本发明的一些实施方案中，优选地，所述重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。

本发明的第二方面提供一种编码本发明第一方面所述重组蛋白的基因，其包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

该基因序列是为了在大肠杆菌中表达所述重组蛋白，根据大肠杆菌对密码子的偏好性，对密码子进行了优化。不同物种对同义密码子的使用频率是不同的，而这种密码子偏好性对翻译过程有影响。如果一条mRNA有很多成簇的稀有密码子，这会对核糖体的运动速度造成负面影响，大大降低蛋白表达水平。在此对基因序列进行密码子优化，适用于大肠杆菌表达，可以提高蛋白表达效率。

本发明的第三方面提供一种表达载体，其包括本发明第二方面所述的基因。

在本发明的一些实施方案中，所述表达载体为pET30a，其具有卡那霉素抗性，表达的融合蛋白具有组氨酸(His)标签。

本发明的第四方面提供一种宿主细胞，其含有本发明第三方面所述的表达载体。

进一步地，所述宿主细胞为真核宿主细胞或原核宿主细胞。

在本发明的一些实施方案中，所述宿主细胞为原核宿主细胞。优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌，更优选地，大肠杆菌为BL21。利用大肠杆菌进行表达具有周期短、费用低、表达量大等优点。