[发明专利]一种去除新生牛血清内毒素的工艺

说明书

本发明公开了一种去除新生牛血清内毒素的工艺，包括如下步骤：取新生牛血清，且该新生牛血清为小公牛喂食过初乳4‑14天且含大量脂类、内毒素和血红蛋白超标的血清；对新生牛血清预滤处理，预滤处理得到预滤上清液；向预滤上清液中加入活性炭进行吸附，活性炭的质量分数为上清液质量的0.5‑2％，待吸附50‑90min后，进行中滤处理；中滤处理后加入内毒素吸附材料进行吸附处理，并在吸附处理进行后滤处理，后滤处理后即得到去除了内毒素的新生牛血清。本发明采用预滤处理、中滤处理以及后滤处理配合内毒素吸附材料，能更好的去除新生牛血清中的内毒素。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体为一种去除新生牛血清内毒素的工艺。

背景技术

丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。它提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。它还能够提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒性物质的总称，是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分，由菌体裂解后释出，又称之为“热原”。其化学成分有磷脂多糖-蛋白质复合物，其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素大都具有一定的毒性，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。因此，含有内毒素的血清不能用于疫苗的生产，只有去除内毒素、保留血清中的营养成分，才可以使这类血清用于疫苗生产，从而变废为宝，得到充分利用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种去除新生牛血清内毒素的工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种去除新生牛血清内毒素的工艺，包括如下步骤：

S1：取新生牛血清，且该新生牛血清为小公牛喂食过初乳4-14天且含大量脂类、内毒素和血红蛋白超标的血清；

S2：对新生牛血清预滤处理，预滤处理得到预滤上清液；

S3：向预滤上清液中加入活性炭进行吸附，活性炭的质量分数为上清液质量的0.5-2％，待吸附50-90min后，进行中滤处理；

S4：中滤处理后加入内毒素吸附材料进行吸附处理，并在吸附处理进行后滤处理，后滤处理后即得到去除了内毒素的新生牛血清。

优选的，S2中预滤处理具体包括步骤：S21：滤除牛血清中纤维蛋白并得滤除液；S22：将滤除液经超滤柱分离成大分子复合物与游离分子；S23：向大分子复合物内加入免疫球蛋白、脂蛋白并聚合成絮状沉淀；S24：将该絮状沉淀经离心、澄清过滤得预滤液，并将该预滤液与游离分子合并得到预滤上清液。

优选的，述S3中中滤处理是通过将处理液离心后得上清液，并将该上清液经粗滤膜过滤。

优选的，S3中活性炭为活性炭颗粒和/或粉末，通过将活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀，经中滤处理去除活性炭并获得中滤处理原料。

优选的，S4中内毒素吸附材料为壳聚糖微球、甘氨酸经偶联反应而成。

优选的，S4中后滤处理包括使用0.8μm滤膜、0.65μm滤膜、0.45μm滤膜、0.1μm滤膜依次逐级过滤，从而获得去除了内毒素的新生牛血清。

优选的，活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀是在搅拌设备中进行，搅拌设备包括搅拌箱、机架、第一搅拌结构与第二搅拌结构，搅拌箱固定在机架端部，搅拌箱内部上、下两侧分别装设有第一搅拌结构、第二搅拌结构；所述第一搅拌结构包括滑轨、齿板、齿轮与第一搅拌杆，滑轨固定在搅拌箱顶壁，滑轨内侧设有弹簧，滑轨上滑接有齿板；所述齿轮通过支架装设于齿板下侧且与齿板啮合，齿轮端部连接有第一搅拌杆，且第一搅拌杆可在齿轮、齿板相互啮合时摆动。