[发明专利]一种L-赖氨酸的发酵方法

权利要求书

1.一种L-赖氨酸的发酵方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）将-80℃保存的保菌管内的L-赖氨酸生产菌谷氨酸棒杆菌接种在斜面培养基上活化；

（2）将斜面培养基上的菌体接种到一级种子摇瓶中培养；

（3）将一级种子液接入5L发酵罐内进行二级种子培养；

（4）将二级种子液接入发酵培养基，发酵罐内进行发酵培养，所述发酵培养的方法为：将种子液放出至剩余800mL，发酵培养基按4:6的比例，40%作为发酵底料定容2.1L，加入到发酵罐内；60%配成发酵浓缩液，定容300mL，从发酵开始后2h开始流加至发酵结束前4h，发酵罐内流加糖为含量80%的葡萄糖、流加45g/L的硫酸铵溶液和硫胺，发酵全程控制发酵温度32℃，溶氧30-50%，pH7.0，当溶氧低于30%时提高转速和风量。

2.根据权利要求1所述的L-赖氨酸的发酵方法，其特征在于：所述步骤（1）中斜面培养基：牛肉膏10g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 2.5g/L，KH₂PO₄ 1g/L，MgSO₄7H2O 0.5g/L，琼脂粉25g/L；培养条件为32℃恒温培养12h。

3.根据权利要求1所述的L-赖氨酸的发酵方法，其特征在于：所述步骤（2）中采用的一级种子培养基为：葡萄糖25g/L，玉米浆15g/L，酵母粉5g/L，尿素5g/L，(NH4)₂SO₄ 5g/L，K₂HPO₄ 10g/L，MgSO₄7H₂O 0.5g/L，KH₂PO₄ 4g/L，V_H 0.2mg/L，V_B1 1.5mg/L，V_{B3、5、7、12}各0.3mg/L，半胱氨酸0.5g/L。

4.根据权利要求3所述的L-赖氨酸的发酵方法，其特征在于：所述步骤（2）中进行一级种子培养的方法为：将斜面上的菌体接种于三个1L的摇瓶，摇瓶中各含有一级种子培养基100mL，用氨水调控pH7.0-7.2，摇床220 rpm/min，32℃恒温培养8-9h，OD₆₀₀达到20。

5.根据权利要求1所述的L-赖氨酸的发酵方法，其特征在于：所述步骤（3）中采用的二级种子培养基为：玉米浆15g/L，(NH4)₂SO₄ 8g/L，NaCl 2.5g/L，MgSO₄7H₂O 4g/L，KH₂PO₄ 5g/L，FeSO₄ 120mg/L，MnSO₄ 120mg/L ，右旋泛酸钙 9mg/L，V_B1 4.5mg/L，V_{B3、5、7、12} 各0.3mg/L，V_H 1.8mg/L。

6.根据权利要求5所述的L-赖氨酸的发酵方法，其特征在于：所述步骤（3）中进行二级种子培养的方法为：将三个100mL的一级种子液和100mL的80%葡萄糖接入5L发酵罐，罐内装有2.6L种子培养基；发酵全程控制发酵温度32℃，溶氧30-50%，pH7.0，当溶氧低于30%时提高转速和风量，培养至OD₆₀₀≥25，种龄21-23h。