[发明专利]一种新城疫病毒及疫苗的无血清全悬浮培养制备方法在审
| 申请号： | 202011451142.1 | 申请日： | 2020-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN113699119A | 公开（公告）日： | 2021-11-26 |
| 发明（设计）人： | 陈杏桃;李鹏杰;杨贵君;郑航辉;叶俊贤 | 申请（专利权）人： | 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/071;A61K39/17;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44467 | 代理人： | 罗啸秋 |
| 地址： | 526238 广东省肇庆市高新区创业路5*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新城 疫病 疫苗 血清 悬浮 培养 制备 方法 | ||
1.一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)取MDCK细胞经复苏后加入到无血清培养基中进行悬浮培养，当细胞长至8.0×106～16×106cells/mL，活率在90％以上时，得到接种培养基质；
(2)将新城疫病毒接种至步骤(1)的培养基质中，悬浮培养进行病毒吸附；然后补加病毒生产液继续进行悬浮培养，得到新城疫病毒；
步骤(2)中所述病毒生产液采用无血清培养基。
2.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：所述新城疫病毒在接种前先进行如下适应与驯化：
将新城疫病毒接种至步骤(1)的培养基质中，悬浮培养进行病毒吸附；然后补加病毒生产液继续进行悬浮培养，每隔12h取样测定病毒的EID50，在病毒滴度最高时收获病毒作为下一代驯化的种毒；按此方法连续传代培养3～4代，收获得到新城疫病毒在MDCK细胞中的适应毒。
3.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(1)中所述无血清培养基为CD MDCK 244无血清培养基；所述悬浮培养的温度为35℃～37℃，培养转速为120rpm～150rpm。
4.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述新城疫病毒为II类VII型流行NDV株DHN3；所述新城疫病毒接种量为10-2-10-5MOI。
5.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述病毒吸附的时间为0.5h～1h；病毒吸附的培养温度为33℃～37℃，培养转速为120rpm～150rpm。
6.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述补加病毒生产液的体积为原有生长培养基体积的1～4倍；所述补加病毒生产液继续进行悬浮培养的温度为33℃～37℃，培养转速为120rpm～150rpm。
7.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述病毒生产液采用的无血清培养基为CD MDCK 244无血清培养基或BHK LSM 228无血清培养基。
8.根据权利要求3所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述病毒生产液采用的无血清培养基为CD MDCK 244无血清培养基。
9.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒的无血清全悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述病毒生产液需补加TPCK胰酶和葡萄糖，并进一步还加入植物蛋白胨、大豆水解乳蛋白和酵母提取物作为补料。
10.权利要求1～9任一项所述的方法培养得到的病毒在制备新城疫疫苗中的应用。
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