[发明专利]一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D3含量的方法

说明书

本发明提供了一种高效液相色谱‑串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D₃含量的方法，包括以下步骤：取制剂内容物用正己烷稀释至合适浓度，进行LC‑QQQ液质联用检测：采用Agilent Zorbax Rx‑Sil色谱柱，流动相为正己烷：正戊醇＝997:3，流速1mL·min^‑1，柱温35℃，APCI源，MRM模式，m/z385.3‑259.1(+)(定量离子)，流路0‑5min切废液，5min后进质谱，外标法定量。经方法学验证，本方法适用于油溶性维生素D制剂中的维生素D₃含量测定，无需任何前处理步骤，无需测定前维生素D₃的相对校正因子，操作简便、快速准确，为油溶性维生素D₃制剂的含量检测提供参考。

技术领域

本发明属于维生素测定技术领域，具体涉及一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素 D制剂中维生素D₃含量的方法。

背景技术

维生素D₃是一种作用于钙、磷代谢的激素前体，具有广泛的临床应用，常用于治疗佝偻病、骨质疏松。我国目前市面上的维生素D滴剂(软胶囊)多为400IU，维生素AD滴剂(软胶囊)中的维生素D₃含量范围在300-1000IU不等，由于维生素D₃为脂溶性维生素，滴剂/软胶囊均制成油溶性的内容物，其中维生素D₃的含量约在10^-5mg·mg^-1级别，植物油相对维生素D₃的量太大，若直接进行HPLC测定则植物油的干扰严重，无法准确定量，按照中国药典(2020版)通则0722^[1]第二法需进行皂化除油、液液萃取、反相富集后再进行正相液相色谱检测，操作繁琐、耗时。近年来二维色谱法广泛应用于复杂基质样品的检测，目前已有报道采用二维色谱法快速测定维生素AD制剂中维生素A、D的含量^[2]，且二维色谱法也新增为2020版药典通则0722^[1]第四法，该类方法通过一维色谱实现维生素D的净化，在二维色谱上进行维生素D的分析，虽然也无需进行人工前处理，但存在着紫外检测仍需测定前D相对校正因子、总分析时间长等缺点。

[1]中国药典2020年版.四部[S].通则0722维生素D测定法：105-106。

[2]张艳海，张大伟，曹莹等.在线二维反相色谱法快速测定维生素AD制剂中维生素A、 D的含量[J].分析测试学报，2016,35(1):28-34。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D₃含量的方法。本发明通过建立液质联用的方法，利用三重四级杆 (QQQ)质谱中MRM扫描模式高灵敏、高特异性的特点，在不需要进行样品前处理，无需测定前维生素D₃相对校正因子的情况下即可对目标组分维生素D₃和前维生素D₃进行快速、准确的定量检测。

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种高效液相色谱-串联质谱法测定维生素D制剂中维生素D₃含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：分别配制供试品溶液和维生素D₃对照品溶液；将供试品溶液和维生素D₃对照品溶液分别注入高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行测定，分别记录供试品溶液和维生素D₃对照品溶液中前维生素D₃和维生素D₃的峰面积，采用外标法对维生素D₃进行定量。

优选，所述的色谱条件为：色谱柱Agilent Zorbax Rx-Sil，3.0×100mm,1.8μm，流动相为正己烷：正戊醇体积比＝997:3，流速1mL·min^-1，柱温35℃。