[发明专利]基于靶点蛋白的多肽筛选方法

说明书

本发明提供了一种基于靶点蛋白的多肽筛选方法。该筛选方法包括：利用多肽芯片技术对带有荧光标记的靶点蛋白进行检测，得到具有不同结合信号强度的多肽集合；按照结合信号强度对多肽集合中的多肽序列进行排序；选取排名靠前的预定数量的多肽序列作为靶点蛋白的候选多肽。通过利用多肽芯片技术能够在短时间内对大量的靶点蛋白完成多个潜在候选的功能多肽的筛选，具有成本低、通量高、候选多肽结合率高及准确率高等特点。尤其对于新冠肺炎的靶点蛋白S，该筛选方法能够高通量地筛选出能够竞争性地降低或抑制S蛋白与ACE2蛋白结合的多肽，从而减弱或抑制新冠病毒对人体的感染作用。

技术领域

本发明涉及多肽筛选领域，具体而言，涉及一种基于靶点蛋白的多肽筛选方法。

背景技术

基于靶点蛋白的筛选方法可以筛选获得具有特定功能的肽段，比如筛选的肽段可以具有特定的医药用途，例如：药物、抗感染制剂等等。这种方法可以筛选出对靶点有直接作用的具有活性的小分子多肽。与基于表型的筛选不同，基于靶点的多肽筛选是对于具有特定生理功能或机理清晰的蛋白质，将其与候选化合物混合后进行生化水平相互作用的定量测定，常用的方法包括酶联免疫、荧光显色、核磁共振等。

传统的基于靶点蛋白的多肽筛选方法存在一定的限制，一般需要先合成候选多肽，再进行与靶点蛋白混合后的筛选，通量低，成本高，难以对同一靶点的多个结合位点进行同时筛选。

为此，仍需要对现有的靶点蛋白的候选多肽的筛选方法进行改进，以提高现有筛选方法的筛选通量。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种基于靶点蛋白的多肽筛选方法，为开发针对靶点蛋白的新的多肽提供基础。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种基于靶点蛋白的多肽筛选方法，该筛选方法包括：利用多肽芯片技术对带有荧光标记的靶点蛋白进行检测，得到具有不同结合信号强度的多肽集合；按照结合信号强度对多肽集合中的多肽序列进行排序；选取排名靠前的预定数量的多肽序列作为靶点蛋白的候选多肽。

进一步地，利用多肽芯片技术对带有荧光标记的靶点蛋白进行检测，得到具有不同结合信号强度的多肽集合包括：将荧光标记的靶点蛋白进行多个浓度稀释，得到多个不同浓度的待测样本；将多个待测样本分别与多肽芯片进行孵育，从而得到不同浓度下与靶点蛋白具有不同结合信号强度的多肽集合。

进一步地，按照结合信号强度对多肽集合中的多肽序列进行排序包括：计算每个浓度下，与靶点蛋白结合的多肽集合中的每种多肽序列对应特征的信号强度值，并按照信号强度值进行排序；优选地，计算每个浓度下，与靶点蛋白结合的多肽集合中的每种多肽序列对应特征的信号强度的均值或中位值，并按照均值或中位值进行排序；更优选地，对根据每个浓度下，每种多肽序列对应特征的信号强度值进行log10转换，并按照转换之后的log10值的均值或中位值进行排序。

进一步地，选取排名靠前的预定数量的多肽序列作为靶点蛋白的候选多肽包括：选择在设定比例的浓度范围中排序均在前第一预定数量的多肽序列作为第一候选集；从第一候选集中去除在空白对照和标准品对照中排序均在前第二预定数量的多肽序列，得到第二候选集；计算第二候选集中每个肽段序列在不同浓度下的均值；根据均值，对第二候选集中的每个肽段进行排序，挑选排名在前第三预定数量的多肽序列，作为候选多肽。