[发明专利]一种深海真菌FS140抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get及其应用

说明书

本发明公开了一种深海真菌FS140抗胶霉毒素自我保护基因mfs‑get及其应用。抗胶霉毒素自我保护基因mfs‑get，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。因此本发明从深海真菌FS140的cDNA文库中获得了抗胶霉毒素自我保护基因mfs‑get序列，并成功导入到酿酒酵母S.cerevisiae BJ5464中进行了抗毒功能验证，从而为后期提高酿酒酵母抗胶霉毒素的能力，提升胶霉毒素的异源表达水平并获得新型胶霉毒素奠定分子生物学基础。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种深海真菌Geosmithia pallida FS140抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get及其应用。

背景技术

前期本课题组从深海真菌Geosmithia pallida FS140中分离得到了20多个胶霉毒素类化合物，包括结构罕见的胶霉毒素类二聚体化合物，其中大部分胶霉毒素类化合物具有明显的抗肿瘤活性。

胶霉毒素(gliotoxin，GT)是一类二酮哌嗪类化合物(epipolythiodioxopiperazine，ETP)，ETP作为重要的毒力因子，其通过不同途经对各种细胞产生特异性毒性，在侵袭性曲霉病中发挥重要协同作用。ETP发挥毒副作用主要通过二硫键，巯基与靶蛋白的交联进而灭活该蛋白活性，并能通过氧化还原循环产生具有毒害的活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)，ROS生成机制被认为是GT产生细胞毒性的一种机制。目前对GT的研究局限于作为ETP家族成员之一或烟曲霉毒素代谢物，因此胶霉毒素的很多毒性(如免疫抑制毒性)研究只集中于其作为初次级代谢产物而发挥毒性，而其本身毒性如细胞毒性、DNA损伤以及对宿主的其他毒性机制尚无定论，有待进一步研究。

胶霉毒素对宿主的毒性主要包括：诱导细胞凋亡；导致氧化还原反应失衡；抑制蛋白酶体活性，导致NF-κB活性被抑制，降低免疫活性等。它不仅对动植物细胞，而且对宿主菌也有毒性(Kamei K,Watanabe A.Aspergillus mycotoxins and their effect on thehost.Medical Mycology,2005,43:S95–S99.)。已有报道宿主菌体内存在某种机制抵抗胶霉毒素对它的毒性，而这种机制的引入对提高工业化生产菌株对毒素的耐受极为关键。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种深海真菌Geosmithia pallida FS140抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get，所述的深海真菌Geosmithia pallida FS140抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的深海真菌Geosmithia pallida FS140抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get通过以下方法获得的：通过转录组测序结果预测编码抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get的序列，在其上下游设计特异性引物，其引物序列为ms-get-F:5'-ATGAATAGGCTGATCAGAGGCCAGG-3'；mfs-get-R:5'-GCCGACAATGGGCAGGCATAG-3'，以由深海真菌FS140转录组反转录而得的cDNA文库为模板，通过PCR扩增获得产物并纯化回收片段，获得抗胶霉毒素自我保护基因mfs-get，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。