[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法

权利要求书

1.一种基于CRISPR/Cas9的白桦基因编辑方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)靶基因sgRNA序列的获取和合成，

(2)CRISPR/Cas9表达载体的构建，

(3)根癌农杆菌瞬时侵染白桦，

(4)工程菌液转化白桦外植体，获取CRISPR/Cas9编辑的稳定遗传转化植株，所述靶基因sgRNA为白桦BpPDS和BpUVR8靶基因sgRNA序列，序列分别如下：

T-P:5’-CATATGCGGATGTGTTTCCGCGG-3’；

T-1:5’-CAGCCAATCAAAGCATTAAATGG-3’。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，培养三周的白桦组培幼苗经25％蔗糖溶液高渗处理后，无菌水冲洗30s，吸干表面液体，使用OD₆₀₀为0.5的农杆菌工程菌LBA4404-pU3b::BpPDS/BpUVR8菌液、添加200uM乙酰丁香酮后，浸没幼苗植株，转速60rmp，温度25℃，培养时间72h。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，遗传转化白桦植株培养基配方：选择分化培养基为WPM+0.8mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+5.0mg/LHYG+500mg/LCef，出芽培养基为WPM+2.0mg/L6-BA+5.0mg/LHYG+500mg/LCef，生根培养基为WPM+0.5mg/LIBA+4.0mg/LHYG+500mg/LCef。