[发明专利]一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法

权利要求书

1.一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1：将待测种子经过或不经过剖切；

步骤2：将待测种子置于质量百分浓度为0.90-1.10%过碘酸溶液中浸泡不少于25min取出，用去离子水清洗后，转入显色液中浸泡不少于8min，取出；所述显色液是含有酸性品红和强还原剂的溶液；

步骤3：用体视镜扫描照相，以白色为对照背景，待测样品图片上所显示的红色即对应表征不饱和脂肪酸积累和分布位点；红色集中区域表明该区域具有不饱和脂肪酸，且红色的深浅程度与所脂肪酸不饱和度呈正相关；

所述白色是指R、G、B均为255；

所述方法进一步包括：使用已有软件或仪器设备对待测样品图片上红色的深浅程度进行定量化，并将定量化的数值与脂肪酸不饱和度进行关联；

所述关联方法包括如下两种方法之一：

方法一，包括如下步骤：

步骤一：采用色差仪测定待测种子不同区域或不同种子的颜色数据L、a、b值；L表示色差值明度、a为红绿色轴分量、b为黄蓝色轴分量；或者使用Photoshop软件获取待测种子图片上选定区域的RGB值；

步骤二：使用近红外法、酶联免疫吸附法、碘价法、气相色谱法中的一种或几种方法联合获得种子不同部位或不同种子的脂肪酸不饱和度；

步骤三：按照上述步骤获得一系列的颜色数据和不饱和度值，然后采用prism统计学软件对种子不同部位或不同种子的脂肪酸不饱和度和对应的颜色数据进行相关性分析，获得种子不同部位或不同种子的脂肪酸不饱和度与颜色数据之间的关联系数；

方法二，包括如下步骤：

将图片中红色的深浅进行数值化，并将该数值与脂肪酸不饱和度进行关联的方法如下：

打开软件ImageJ，选择菜单中的file，下拉菜单选择open打开待分析图片；选择图标Rectangularselections，在图片中选择待分析的目标区域；选择菜单栏中的Analyze下拉菜单的Measure；弹出对话框中的第二列即为所选择区域的平均灰度值；

以RMGV表示相对平均灰度值，最大值定义为1；RMGV=(255-区域1平均灰度值)/(255-区域2平均灰度值)/……/(255-区域n平均灰度值)，由于ImageJ定义纯白色的值为255，纯黑色的值为0，公式中用255减去待测定区域的平均灰度值，转换成与颜色深浅呈正相关的数值大小，即数值越大，对应区域颜色越深；公式中“/”表示不同区域之间测定数值的比；

DUFA表示总脂肪酸不饱和度，其计算公式为DUFA=Σ[(M:n)mol×n]×10⁶=[(M:1)mol+(M:2)mol×2+(M:3)mol×3+……（M:n）mol×n]×10⁶，其中M为脂肪酸碳链的长度，n为双键的个数，mol为该脂肪酸的摩尔数，摩尔数等于质量除以该种脂肪酸的分子量，Σ表示不同碳链和不同双键脂肪酸不饱和度的和；RDUFA表示相对总脂肪酸不饱和度，各个样品值与其中最大值的比值，最大值定义为1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测种子为水稻种子。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测种子可以是来源于种子出现直到完全成熟的生长发育各个时期的种子；

当待测种子是完全成熟的植物种子时，在蒸馏水中于2-4℃浸泡至易于剖切；当待测种子是开花期间且较硬的种子时，直接剖切开；当待测种子是开花期间且较软的种子时，先在-15℃-25℃低温冷冻后进行剖切；所述剖切为横切或纵切。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述种子为水稻种子。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述显色液含有0.4-0.6g/L酸性品红和亚硫酸氢钠的溶液。