[发明专利]一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法

说明书

本发明涉及一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法，包括：步骤1：将待测种子经过或不经过剖切；步骤2：将待测种子置于质量百分浓度为0.90‑1.10％过碘酸溶液中浸泡不少于25min取出，用去离子水清洗后，转入显色液中浸泡不少于8min，取出；所述显色液是含有酸性品红和强还原剂的溶液；步骤3：用体视镜扫描照相，以白色为对照背景，待测样品图片上所显示的红色即对应表征不饱和脂肪酸积累和分布位点；红色集中区域表明该区域具有不饱和脂肪酸，且红色的深浅程度与所脂肪酸不饱和度呈正相关。本发明实现了在自然状态下对植物种子中不饱和脂肪酸的积累和分布模式的高灵敏度、快速、低成本、高效率、无毒、无污染的检测，用于筛选脂肪酸不饱和双键含量不同的种质资源。

技术领域

本发明涉及种子脂肪酸不饱和度的检测方法，特别是一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法。

背景技术

不饱和脂肪酸是人体不可缺少的脂肪酸，人体不能合成油酸、亚油酸和α-亚麻酸，必须从膳食中补充，这些脂肪酸具有保持细胞膜的相对流动性，以保证细胞的正常生理功能。

植物中油脂的分布呈现出显著的不均匀性，除少数植物在茎、果肉中富集外(Phytochemistry2007,68:2112–2117)，几乎都积累于植物的成熟种子中，不同植物种子中含油量及脂肪酸的构成大相径庭，即使同一种子中油脂分布也不尽相同(J.Biol.Chem.2012,287:2288–2294)。无论是研究种子发育过程油脂合成相关基因的协同作用，还是揭示碳代谢流在“源”和“库”之间如何定量转移和分配的，最后都离不开鉴定油脂及脂肪酸在种子“库”中的积累和分布情况，而植物中不饱和脂肪酸所占比重较大。因此，有必要提供一种不破坏种子结构、灵敏、高效的检测植物种子中不饱和脂肪酸的新方法。

目前，检测不饱和脂肪酸的方法有近红外法、酶联免疫吸附法、碘价法、气相色谱法等(中国现代应用药学，2014，31：246–252)，除近红外法不需要破坏待测样品外，其余的方法都需要预先分离提取植物组织中的脂肪酸，但近红外法需要提前建立模型，并且依赖价格不菲的近红外分析仪(如CN201810917861.4公开一种植物油料中脂肪酸含量的近红外检测方法)；酶联免疫吸附法首先要制备质量较高的抗体，其次是较为复杂的实验流程；碘价法用到的氯化汞有剧毒，并且此方法耗时比较长。气相色谱法对进样样品要求较高，需要先进行衍生化反应，以便于仪器的检出，同样需要高昂的仪器设备平台(中国油料作物学报，2015，4：548–553)。综上所述，现有

发明内容

(一)要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法，实现了在自然状态下对种子中不饱和脂肪酸的积累和分布模式的高灵敏度、快速、低成本、高效率、无毒、无污染的检测。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

本发明提供一种原位检测种子中脂肪酸不饱和度的方法，所述方法包括：

步骤1：将待测种子经过或不经过剖切；

步骤2：将待测种子置于质量百分浓度为0.90-1.10％过碘酸溶液中浸泡不少于25min取出，用去离子水清洗后，转入显色液中浸泡不少于8min，取出；所述显色液是含有酸性品红和强还原剂的溶液；

步骤3：用体视镜扫描照相，以白色为对照背景，待测样品图片上所显示的红色即对应表征不饱和脂肪酸积累和分布位点；红色集中区域表明该区域具有不饱和脂肪酸，且红色的深浅程度与所脂肪酸不饱和度呈正相关。

本发明测试的化学原理是基于含不饱和键的脂肪酸类物质被过碘酸氧化后可以跟Schiff试剂发生反应进而显色。