[发明专利]一种PRRSV N蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202011346127.0 | 申请日： | 2020-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN112457397A | 公开（公告）日： | 2021-03-09 |
| 发明（设计）人： | 孙亚妮;段红;赵钦;周恩民 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C12N15/13;C07K19/00;C12N15/85;G01N33/535;G01N33/569;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京盛询知识产权代理有限公司 11901 | 代理人： | 张海青 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 prrsv 蛋白 纳米 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种PRRSV N蛋白的纳米抗体，其特征在于：命名为PRRSV-N-Nb1，氨基酸序列如SEQID No.1所示。
2.一种编码权利要求1所述纳米抗体氨基酸序列的核苷酸分子，其特征在于：所述核苷酸分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
3.一种含有权利要求1所述的纳米抗体与HRP的融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)重组真核表达载体的构建：通过扩增、双酶切，将编码纳米抗体PRRSV-N-Nb1的基因序列连接至pEGFP-N1-HRP载体中获得阳性质粒；
(2)将步骤(1)中阳性质粒转化宿主细胞，诱导表达纳米抗体与HRP融合蛋白。
5.根据权利要求4所述的纳米抗体与HRP的融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述宿主细胞为HEK 293T细胞。
6.一种根据权利要求3所述的融合蛋白在制备检测猪血清中PRRSV抗体的产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白在制备检测猪血清中PRRSV抗体的产品中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将PRRSV N蛋白包被ELISA板；
(2)将所述融合蛋白与猪血清混合后加入步骤(1)的ELISA板中，孵育；
(3)在步骤(2)的ELISA板中加入显色液避光显色，加入3M浓H2SO4终止反应；
(4)观察ELISA板的颜色变化，若猪血清中有PRRSV抗体，则ELISA板内孔为无色；若猪血清中无PRRSV抗体，则ELISA板内孔为黄色。
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