[发明专利]一种新型转座子突变株文库的构建系统

权利要求书

1.一种构建突变株文库的新型转座子系统，其特征在于：构建步骤如下：

模仿天然的转座子质粒，人工构建一个在ITRs区域中额外添加了转座酶基因tnpA的新型转座子质粒载体；

在ITRs区域中额外添加的转座酶基因tnpA能够受到阿拉伯糖启动子基因araBAD和阿拉伯糖抑制蛋白基因araC调控；

先将转座子质粒化转到E .coli S17-1 λpir中，再利用接合转移mating方法，获得一个含有转座子的不同物种的转座子突变株；

该转座子突变株在基因组的任一位置上具有一个转座子插入序列，该插入序列包括：两端的ITRs区域，阿拉伯糖启动子基因araBAD，阿拉伯糖抑制蛋白基因araC和转座酶基因tnpA；

扩增培养一个转座子突变株，在细胞数达到10¹² cfu/mL时，添加终浓度为2 mg/ml的阿拉伯糖，诱导培养2 h使转座子跳跃，随机获得全基因组范围内多种插入基因形式的转座子突变株文库；

所述步骤中转座子质粒载体具有如下特征：

去除了tnpA转座酶基因的pKKma转座子质粒基因序列；

在ITRs区域中加入了阿拉伯糖启动子基因araBAD和阿拉伯糖抑制蛋白基因araC；

在ITRs区域中加入了受阿拉伯糖调控的转座酶基因tnpA；

所述pKKma转座子质粒的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；

所述步骤中tnpA转座酶的基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.3；

所述步骤中新型转座子质粒载体的核苷酸序列为SEQ ID NO.4；

所述步骤中先将转座子质粒载体化转到E .coli S17-1 λpir中，获得含有稳定表达且受阿拉伯糖调控的转座酶基因tnpA的大肠杆菌菌株，再利用常见的接合转移mating方法，获得一个含有转座子的其他物种的转座子突变株；

所述步骤中能够根据构建文库的需求，控制转座子突变株的菌浓和体积，且转座酶诱导转座子跳跃的过程是能够调控的；

所述步骤中编码阿拉伯糖启动子基因araBAD和阿拉伯糖抑制蛋白基因araC的核苷酸序列为SEQ ID NO.2；

所述方法能够得到覆盖全基因的多种基因插入形式的全基因组转座子文库。