[发明专利]一种分泌型靶向HER2抗原的嵌合抗原受体T细胞及其应用

说明书

本发明涉及CAR‑T细胞领域，特别涉及一种分泌型靶向HER2抗原的嵌合抗原受体T细胞及其应用。利用从外周血中获得的T细胞，在含靶向实体瘤CAR基因病毒转导的过程中，同时将构建的人源化IL‑7、IL‑15基因转入T细胞，获得分泌型靶向HER2 CAR‑T细胞T细胞。内源性的IL‑7及IL‑15有促进T细胞在肿瘤组织内的存活，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及CAR-T细胞领域，特别涉及一种分泌型靶向HER2抗原的嵌合抗原受体T细胞制备及应用

背景技术

过继免疫治疗是将自身或异体的免疫细胞或免疫因子在体外扩增后，回输给免疫功能低下者如肿瘤患者，使其获得抗肿瘤免疫力的过程。主要分为过继性免疫因子治疗和过继免疫细胞治疗(adoptive cell transfer therapy，ACT)，CAR-T细胞疗法属于过继性细胞免疫疗法的范畴。

CAR-T疗法，全称嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。是一种以患者自身T细胞为基础的治疗，通过白细胞分离术收集患者的外周血单核细胞(PBMC细胞)，再分离出特定的T细胞亚群，如CD4+、CD8+、CD25+或CD62L+T细胞。分离出的T细胞起始亚群需要持续和充分的激活才能实现体外扩增，这就需要通过T细胞受体信号和CD28、4-1BB或OX40信号等共刺激信号产生主要的特异性信号，从而激活T细胞。再通过电穿孔、慢病毒或逆转录病毒载体，将CAR基因导入激活的T细胞中进行基因修饰，从而得到可表达CAR基因的CAR-T细胞。简单来说，就是从癌症病人身上分离出免疫T细胞，利用基因工程技术的手段为T细胞引入一个能够识别肿瘤细胞并同时激活T细胞的嵌合抗原受体CAR，然后将扩增好的CAR-T细胞回输到病人体内。

嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor)T细胞技术是不受免疫系统MHC的限制性，通过基因改造技术能够对肿瘤细胞特异靶向，从而对肿瘤进行杀伤的一种发展迅速的细胞治疗技术。自2017年FDA批准了诺华公司的Tisagenlecleucel以及Kite的Axicabtegene Ciloleucel两种CAR-T细胞产品上市以来，其分别用于治疗儿童和年轻人B细胞急性淋巴性白血病以及成人复发性或难治性大B细胞淋巴瘤，CAR-T免疫疗法在针对血液瘤涉及急性B淋巴细胞白血病、非霍奇金氏淋巴瘤以及多发性骨髓瘤等的治疗方面取得了显著成效。并且美国医保与医助服务中心(Centers for Medicare and MedicaidServices,CMS)于2019年2月15日正式发布拟议决定备忘录：批准CAR-T细胞治疗正式纳入医保。这使得CAR-T疗法能够更快速的运用于临床，为患者带来福音。

据《2018年全球癌症统计数据》显示中国癌症的发病人数及死亡人数均为世界第一。肺癌、乳腺癌以及结直肠癌为全球发病率最高的三种癌症，而死亡率最高的则分别为肺癌、结直肠癌和胃癌。尽管CAR-T疗法在血液瘤中取得显著的进展，而其针对实体瘤的治疗仍有待解决。

表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2/ErbB2)属于表皮生长因子受体家族的一种蛋白，在细胞生长，发育和分化过程中起着重要作用，HER2蛋白过量表达会导致细胞功能紊乱并与肿瘤的发生有着密切的关系。在上皮细胞癌症中，HER2高表达的细胞表现出了增强的迁移性和浸润性，患者预后差且容易复发。近年来基于抗体的肿瘤靶向治疗取得了一定的进步，如靶向HER2的曲妥珠单抗。尽管曲妥珠单抗在一线治疗中取得了部分进展，但由于抗体在体内易代谢，细胞和组织中渗透性差等自身性质，再加之肿瘤组织微环境的影响等，使得该靶向疗法仍然存在局限性。