[发明专利]猫脂肪间充质干细胞在制备治疗猫急性肾损伤制剂中的应用

说明书

本发明提供一种猫脂肪间充质干细胞在制备治疗猫急性肾损伤制剂中的应用，涉及生物工程技术领域。本发明通过实验证明猫脂肪间充质干细胞能有效缓解猫急性肾损伤的症状，减少肾脏组织损伤。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及一种猫脂肪间充质干细胞在制备治疗猫急性肾损伤制剂中的应用。

背景技术

猫急性肾损伤是一种由肾小球滤过能力突然下降所引起的临床综合征，初始发病症状为口干、尿频、嗜睡等，如果救治及时，大多数情况下肾损伤可以得到缓解，但是由于猫本身性格比较安静，耐受性和忍耐性强，患病时不容易被人们发现，错过最佳救治时间，急性肾损伤转变为慢性肾功能衰竭，猫患病的死亡的概率也会大大增加。

虽然医疗技术有了很大的发展与进步，但肾脏疾病的治愈率依然很低。目前，治疗猫肾损伤的方法主要包括：(1)使用利尿剂、多巴胺、钙通道拮抗剂、中药等药物治疗；(2)肾脏替代疗法，如透析；(3)肾移植。但是，这些方法存在供体短缺及各种并发症、免疫抑制剂副作用大等问题。因此，有必要开发新的治疗方式来克服现有技术中存在的问题。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种猫脂肪间充质干细胞在制备治疗猫急性肾损伤制剂中的应用，实验证明猫脂肪间充质干细胞能有效缓解猫急性肾损伤的症状，减少肾脏组织损伤，而且免疫原性低，不会引起免疫排斥反应。

本发明的目的在于提供一种猫脂肪间充质干细胞在制备治疗猫急性肾损伤制剂中的应用。猫脂肪间充质干细胞具有向肾实质细胞分化的潜能，可分化为系膜细胞、上皮细胞以及内皮细胞等多种类型肾脏细胞，从而修复肾小管，恢复肾小管结构与功能。

在其中一个实施例中，所述猫脂肪间充质干细胞通过以下方法制备得到：

消化：取猫腹部皮下脂肪组织，清洗后剪碎为组织块，加入胶原酶溶液进行消化，消化后过滤，将滤液离心，保留沉淀；

培养：向上述沉淀中加入培养液制成细胞悬液，接种至培养皿中进行培养，定期更换培养液、传代，即得猫脂肪间充质干细胞。

在其中一个实施例中，所述消化步骤具体为：取猫腹部皮下脂肪组织，置于含双抗的PBS 溶液中，取出用酒精浸泡清洗2-4次，用PBS清洗2-3次，用含双抗的PBS溶液清洗2-3次，清洗后剪碎约为0.8-1.2mm³大小的组织块，加入2-3倍体积的浓度为0.8-1.2mg/mL的Ⅰ型胶原酶溶液，于37±1℃中消化20-40min，消化液用200目细胞筛过滤，滤液以1100-1300r/min 离心4-6min，弃去上清液，保留沉淀。

在其中一个实施例中，所述培养步骤具体为：向上述沉淀中加入含FBS、L-Glutamine、双抗的DMEM培养液悬浮细胞，接种于培养板中，放置于37±0.5℃、氧气体积百分含量为5±0.5％、二氧化碳体积百分含量为5±0.5％的条件下培养，每2-3天换一次培养液，直到细胞长满80-90％，进行传代，P1代、P2代细胞冻存，取P3-P6代细胞用于制备治疗急性肾损伤制剂。其中，双抗是指青霉素-链霉素。

本发明另一方面还提供一种治疗猫急性肾损伤制剂，该制剂中包括猫脂肪间充质干细胞。优选地，所述猫脂肪间充质干细胞为采用上述方法培养的P3-P6代细胞。

在其中一个实施例中，所述猫脂肪间充质干细胞的阳性表面标记物CD44、CD90和CD105 的表达量≥99％，阴性表面标记物CD34表达量≤1％。

在其中一个实施例中，所述猫脂肪间充质干细胞，在37±0.5℃、氧气体积百分含量为5 ±0.5％、二氧化碳体积百分含量为5±0.5％的条件下培养得到。

在其中一个实施例中，所述制剂中还包括间充质干细胞保存液和生理盐水。

在其中一个实施例中，所述间充质干细胞保存液包括以下重量百分数的原料：