[发明专利]一种多通道灌流培养细胞的方法

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其为一种多通道灌流培养细胞的方法，从而实现了多通道蠕动泵泵液使得罐内液体流动温和均匀，增大循环效率，产生剪切力小，对细胞无损伤；多通道灌流能够用于大体积的反应器，增大了细胞的培养体积；溶氧传感器与PH传感器贴片固定于反应器玻璃罐内部，传感器探头固定于反应器玻璃罐外部，无接触测量PH及溶氧，能实时反应出培养罐内的溶氧量及PH值同时避免污染风险；PID闭环精准控制CO2及02流量，能够实现快速精准调节，溶氧量精确主动控制，PH值精确主动控制；增加氧合器模块，能够更好的进行液体与气体的交换，提高溶氧效率，避免传统鼓泡式溶氧方式对细胞产生的应力与剪切力损伤的效果。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体为一种多通道灌流培养细胞的方法。

背景技术

在细胞培养生产工艺中，一些细胞的生长对环境的要求苛刻，剪切力，温度变化，PH值，溶氧供应都能影响细胞的生长，市面上带桨的反应器所产生的剪切力较大，不利于一些细胞的生长；当反应器罐体内培养体积较小时，单通道灌流培养细胞能够取得较好的结果；但是若培养罐内的体积较大时，单通道灌流速度较慢，若不增大灌流的速度会导致细胞发生沉降现象，细胞的供氧不足会导致细胞的活性降低，甚至死亡；若单纯的增加蠕动泵的转速来提高细胞的灌流速度，细胞在蠕动泵高转速带动下会受到很大的剪切力，会降低细胞活性，加快细胞死亡。

综上所述，本发明通过设计一种多通道灌流培养细胞的方法来解决存在的问题

发明内容

本发明的目的在于提供一种多通道灌流培养细胞的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种多通道灌流培养细胞的方法，其具体步骤如下：

S1,培养基加注：F1,F2,F3,F3,F4,F5,F6，F7,F8,为装有培养基的培养袋，WS1,WS2，WS3,WS4,WS5,WS6，WS7,WS8称重传感器，培养基通过蠕动泵P1泵入到加热模块H1,再进入到离心模块C罐内，再经过蠕动泵P3泵入到培养罐内，完成培养基的加注；

S2,细胞加注：通过注射器刺入培养罐加注口完成细胞液的加注；

S3,主回路循环：通过两个电机带动四个蠕动泵头驱动，即两个单电机双泵头驱动，让培养罐内的液体实现灌流；主循环采用四通道灌流培养，其中一路经过氧合器即膜式气体交换单元；氧气与二氧化碳经过气动二联件，再经过质量流量控制器，经过空气过滤器进入到氧合器G，溶入到培养液中进入培养罐内，给细胞提供充足的溶氧及二氧化碳；培养罐内部有PH及溶氧传感器贴片，PH与溶氧传感器探头在培养罐外部，无直接接触培养液进行检测培养罐内部的PH及溶氧；当PH偏高时，PID会控制质量流量控制器往培养罐内注入定量的二氧化碳，形成碳酸调节PH；当PH偏低时，会通过蠕动泵P5将F7袋内的PH值调节液体入到培养罐内实现调节PH；

S4,取样模块：通过蠕动泵P4将细胞液从培养罐内泵出，完成取样，取样之前，针头一直泡在酒精清洗容器内部，取样后用真空泵VP将取样后的废液泵入到废液袋F8，F8上部有称重传感器WS8，当重量达到设定值时，会报警提醒工作人员换废液袋；

S5,上清收集：通过蠕动泵P3将培养液泵入到离心模块C内，电机带动离心罐高速运动行，通过离心运动将细胞与上清液分离，蠕动泵将上清泵入到上清收集袋F2内；

S6,细胞收集：通过蠕动泵P3将培养液泵入到离心模块C内，电机带动离心罐高速运动行，通过离心运动将细胞与上清液分离，蠕动泵将上清泵入到上清收集袋F2内。

优选的，所述S1中F1,F2,F3,F3,F4,F5,F6，F7,F8,为装有培养基的培养袋分别与一一对应对悬挂在WS1,WS2，WS3,WS4,WS5,WS6，WS7,WS8称重传感器的下方，S2中培养罐上方设置有细胞加注口并且细胞加注口设置有肝素帽。