[发明专利]一种定量检测UCHL-1的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种定量检测UCHL‑1的试剂盒及其应用，属于生物检测技术领域。所述的试剂盒由检测试剂条、校准品、质控品、二维码组成；所述的检测试剂条包括试剂A和试剂B；所述的试剂A为以酶标记UCHL‑1抗体偶联物作为原料，使用缓冲液B将其充分混匀配制成的溶液；所述的试剂B为以UCHL‑1抗体磁微粒偶联物作为原料，使用缓冲液C将其充分混匀配制成的溶液，在实施过程中通过控制缓冲液B和缓冲液C的具体组分以及组分之间的质量比，使制备得到的试剂盒的外观、准确度、空白限、检出限、定量限、线性、重复性、校准品和质控品瓶间差等指标的研究符合要求，在全自动化学发光免疫分析仪上验证合格,测定结果满足企业标准要求。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种定量检测UCHL-1的试剂盒及其应用。

背景技术

蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5，PGP9.5)，又名泛素羧基端水解酶(Ubiquitincarboxy-terminal hydrolase，UCH-L1)，是由223个氨基酸组成的一类半胱氨酸水解酶，分子量约为24800Da。这些酶通过ATP-依赖的蛋白酶体途径参与细胞中蛋白质的泛素和去泛素化。UCH-L1基因的突变和缺失与家族性帕金森病、轴索营养不良症等都有密切关系。创伤性脑损伤(TBI)是由外力引起的大脑损伤，会破坏大脑正常功能，导致人的认知能力或身体机能受损。在所有类型TBI中，最常见的后遗症为头痛(47.9％)和记忆异常(42％)(《英国神经外科杂志》，2018)，约三成患者需要心理辅导或神经病学治疗。TBI是神经外科中最常见疾病，也是世界范围内主要的死亡原因及致残因素之一，其后遗症对患者健康有永久性影响。有研究表明，全球范围内TBI发生率为790-979人/10万/年(《柳叶刀》，2017)，全球每年估计有5400-6000万人新患TBI。以此估算，中国每年新增TBI患者1100-1370万人。

目前，CT扫描是广泛用于帮助临床医师评估TBI的唯一客观、简单且可靠的选择。然而，CT结果的正确性与CT设备的准确性及医师的阅片水平直接相关，和其他检测方法相比，是一种相对主观的判断方法。约90％轻度TBI(有时被称为“脑震荡”)的CT扫描结果呈阴性(Toth，2015)。这些患者中只有不到1％的人需进行神经外科干预(Papa L，2012)。鉴于这些患者的CT扫描阳性百分比非常低且不必要影像学检测可能会增加辐射诱发癌变的风险，寻找开发其他的脑损伤诊断方法来准确判断颅脑损伤程度和评估预后，具有巨大的临床意义和战略意义。

UCH-L1作为脑中含量最丰富的蛋白质之一，其含量可占脑可溶蛋白的2％。(应天舒，泛素羧基末端水解酶L1的分布及改变，2013)UCH-L1经由泛素相关途径行使对细胞增生、分化和凋亡的调节功能。在TBI中，UCH-L1在1小时内会通过血脑屏障进入血液，导致血清UCH-L1显著升高。对TBI的早期诊断，鉴别诊断和判断预后有重要的意义(刘媛，泛素羧基末端水解酶-1的研究进展，2008)，临床上主要用于脑外伤的辅助诊断。

中国专利申请201711226300.1中公开了一种磁微粒化学发光定量检测UCHL-1的试剂盒及其制备方法，所述的试剂盒，包括磁分离试剂、抗体试剂、酶标试剂、底物、洗液、校准品、质控品、磁套和吸头。该发明还公开了上述试剂盒的制备方法。但是该申请提供的试剂盒的检测上限、反应速度和检测灵敏度并不满足要求，并且不能提高检测的准确度和重复性，对检出限和线性关系也没有涉及。

本发明的目的是为了能够快速、简便地检测人外周血中脑特异性蛋白产物的含量，而提供的一种操作简便、能为创伤性脑损伤提供辅助诊断的体外诊断试剂盒及其制备方法和应用。该试剂盒在明显提高检测上限、反应速度和检测灵敏度的基础上，提高检测的准确度和重复性，并且检出限较低，线性关系良好。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供一种定量检测UCHL-1的试剂盒，能够在明显提高检测上限、反应速度和检测灵敏度的基础上，提高检测的准确度和重复性，并且检出限较低，线性关系良好。

本发明是通过如下技术方案来实现的：