[发明专利]维罗毒素的检测方法

说明书

本发明为维罗毒素的检测方法。使用质谱分析来更准确地进行维罗毒素的检测。维罗毒素的检测方法具备：准备试样和与维罗毒素结合的分子；进行利用上述分子与维罗毒素的结合来纯化试样中的维罗毒素的操作；以及，将通过上述操作而得到的试样供于第1质谱分析。

技术领域

本发明涉及维罗毒素(verotoxin)的检测方法。

背景技术

由肠出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli：EHEC)引起的食物中毒的原因在于由EHEC所产生的维罗毒素。维罗毒素存在1型和2型，二者通过血清学方式来区分，1型和2型各自存在多种亚型。维罗毒素的检测对于成为食物中毒原因的食品的鉴定、诊断或症状的预测等是重要的。

非专利文献1中，通过聚合酶链反应(PCR：Polymerase Chain Reaction)扩增并检测了维罗毒素的基因。该方法中，能够判定在试样中包含的细菌中是否存在维罗毒素的基因，但并不能区分在该细菌中是否表达了维罗毒素。非专利文献2中，利用免疫色谱法检测了维罗毒素的1型和2型，但无法区分亚型。非专利文献3中，通过在质谱分析中在对应于维罗毒素的m/z附近是否存在峰来判定在试样中是否包含维罗毒素。然而，若对应于杂质的峰存在于对应于维罗毒素的m/z附近则呈假阳性。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：势户等其他2人＂腸管出血性大腸菌(EHEC)検査·診断マニュアル(肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)检测/诊断手册)＂、(日本)、国立感染症研究所、2019年9月25日

非专利文献2：NH Foods Ltd.、＂NHイムノクロマトVT 1/2＜＜取扱説明書＞＞第1版(NH免疫色谱法VT 1/2使用说明书第1版)＂、(日本)、NH Foods Ltd.、2009年12月

非专利文献3：Fagerquist CK,Zaragoza WJ,Sultan O,Woo N,Quinones B,Cooley MB,Mandrell RE.Top-down proteomic identification of Shiga toxin 2subtypes from Shiga toxin-producing Escherichia coli by matrix-assisted laserdesorption ionization-tandem time of flight mass spectrometryApplied andenvironmental microbiology,(美国),American Society for Microbiology,2014年5月，Volume 80,Issue 9,pp.2928-2940

发明内容

发明要解决的问题

优选使用质谱分析来更准确地进行维罗毒素的检测。

用于解决问题的方案

本发明的第1方式涉及一种维罗毒素的检测方法，其具备：准备试样和与维罗毒素结合的分子；进行利用前述分子与维罗毒素的结合来纯化前述试样中的维罗毒素的操作；以及，将通过前述操作得到的前述试样供于第1质谱分析。

发明的效果

根据本发明，能够使用质谱分析更准确地进行维罗毒素的检测。

附图说明

图1是示出一个实施方式的维罗毒素的检测方法的流程的流程图。

图2是示出维罗毒素的B亚单位的各亚型的氨基酸序列的表格。

图3是实施例1中使用抗维罗毒素2抗体进行纯化操作而得到的试样的质谱图。