[发明专利]一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法

说明书

本发明属于多倍体育种技术领域，公开了一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，包括：将原球茎转接至含有0.05％的秋水仙素的1/2MS+1mg/l 6‑BA+0.2mg/l NAA+5g/l琼脂+20g/l蔗糖固体培养基中培养15天进行诱导处理；处理后用无菌水冲洗3‑4次，用滤纸吸干水分，转接在1/2MS+5g/l琼脂+20g/l蔗糖培养基中，继代培养2‑3次；多倍体鉴定：分别进行形态学观察、气孔鉴定和倍性鉴定；数据统计。本发明用不同浓度秋水仙素及不同处理时间对蝴蝶兰原球茎进行共培法加倍处理，为多倍体诱导培育花大色艳、观赏价值高的蝴蝶兰新品种奠定基础。

技术领域

本发明属于多倍体育种技术领域，尤其涉及一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法。

背景技术

目前，蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属(Phalaenopsis)植物，花色繁多、形似蝴蝶，有“兰花皇后”的美誉。在花卉市场中，蝴蝶兰以花大色艳在花卉市场备受欢迎，栽培种主要为四倍体、三倍体和非整倍体，其中四倍体占绝大多数，可达82％，且多倍体常具有株型粗壮、叶花器官巨大、抗逆性强等优点，因此对蝴蝶兰进行多倍体育种诱导是蝴蝶兰育种的一个不可或缺的方式。兰花的组织培养技术较为成熟，因此兰花中大多采用组织培养结合加倍的方式进行多倍体诱导即离体加倍诱导。目前，兰花多倍体育种在石斛兰、蝴蝶兰、大花蕙兰等热带兰中的研究较多，兰花离体加倍常以种子、原球茎、丛生芽、茎段、嫩叶等分裂旺盛的器官为诱导对象，以秋水仙素、安磺灵等为诱导试剂，采用浸泡法、共培法、点滴法等方式诱导多倍体植株。研究表明，相比其他外植体，原球茎具有更高的繁殖系数，可产生大量植株，因此在离体加倍中大多选择原球茎为研究对象。蝴蝶兰原球茎诱导中，崔光荣等采用了浸泡法比较秋水仙素不同浓度及时间处理对原球茎的诱导效果，Astrid Aditya Putri等采用了50mg/l秋水仙素处理浸泡法10天比较了不同培养基对原球茎诱导的影响，此外Grlesbach等采用秋水仙素共培法诱导了蝴蝶兰原球茎，但仅有0.5mg/l、10天一个处理，并没有对秋水仙素的最适处理进行探讨。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：蝴蝶兰染色体加倍技术不稳定，加倍率较低，前人采用秋水仙素共培法诱导蝴蝶兰原球茎的研究中，并没有对秋水仙素的最适浓度和处理时间进行探讨。

解决以上问题及缺陷的难度为：秋水仙素共培法诱导原球茎时的浓度和处理时间需要掌握适度，过高会使得原球茎成活率过低，过低则会使得诱导率过低。

以上问题及缺陷的意义为：本发明采用不同浓度秋水仙素及不同处理时间对蝴蝶兰原球茎进行共培法加倍处理，以探讨秋水仙素诱导原球茎加倍的适宜条件，为蝴蝶兰多倍体诱导技术的改进以培育花大色艳、观赏价值高的蝴蝶兰新种质提供基础。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法。

本发明是这样实现的，一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，所述秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法包括以下步骤：

步骤一，多倍体诱导：将原球茎转接至含秋水仙素的1/2MS+1mg/l6-BA+0.2mg/lNAA+5g/l琼脂+20g/l蔗糖固体培养基中进行加倍诱导处理。

步骤二，秋水仙素处理后用无菌水冲洗3-4次，用滤纸吸干水分，转接在1/2MS+5g/l琼脂+20g/l蔗糖培养基中，继代培养2-3次。使原球茎分化，长叶长根，长成组培苗。

步骤三，多倍体鉴定：分别进行形态学观察、气孔鉴定和倍性鉴定。

蝴蝶兰多倍体的形态、气孔特征区别于二倍体，因此，通过植株形态和气孔特征鉴定蝴蝶兰倍性可以作为间接指标。形态学鉴定是最基础、最简单的鉴定方式，主要通过植株的植株大小、株型、叶长、叶宽、叶片厚度、叶片颜色等形态初步鉴定植株的倍性。气孔鉴定则通过气孔大小/密度等初步鉴定植株的倍性。