[发明专利]一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法

权利要求书

1.一种秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，其特征在于，所述秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法包括以下步骤：

多倍体诱导：将原球茎转接至含秋水仙素的固体培养基中进行诱导处理；

将经秋水仙素处理的原球茎转接在培养基中，继代培养；

多倍体鉴定：对所得的原球茎分别进行形态学观察、气孔鉴定和倍性鉴定；

对获得的数据进行统计和分析，所述分析包括进行方差分析和采用LSD多重比较方法，其中数据变动范围值均为所有处理数据值的标准差；

所述多倍体诱导处理的方法，包括：

(1)试验为两因素三水平，无菌条件下，将原球茎转接至含有浓度为0.05％、0.1％、0.2％秋水仙素的1/2MS+1mg/l 6-BA+0.2mg/l NAA+5g/l琼脂+20g/l蔗糖固体培养基中，分别处理5、10、15天；

(2)以不加秋水仙素的1/2MS+1mg/l 6-BA+0.2mg/lNAA+5g/l琼脂+20g/l蔗糖固体培养基为对照组，一共10个处理，每个处理重复五次。

2.如权利要求1所述的秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，其特征在于，继代培养的条件为：所述光照强度为2000lx，每日光照时间为12-14h，温度为25±2℃，pH为5.8。

3.如权利要求1所述的秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，其特征在于，秋水仙素处理后用无菌水冲洗原球茎3-4次，用滤纸吸干水分，并将其转接在1/2MS+5g/l琼脂+20g/l蔗糖培养基中，继代培养2-3次。

4.如权利要求1所述的秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，其特征在于，所述形态学观察包括：植株分化成苗均有4片完全展开的叶片后，选取对照株和鉴定后成功加倍的变异株各15株，对植株长势、叶片大小、颜色等进行观察记录并对植株株高、叶片长宽进行测量比较。

5.如权利要求1所述的秋水仙素诱导蝴蝶兰原球茎产生多倍体的方法，其特征在于，所述气孔鉴定包括：

(I)使用无色透明指甲油，取加倍和未加倍植株各10株相同部位的叶片，在叶片下表皮涂抹一层无色透明指甲油；

(II)指甲油干后，用镊子撕取叶片下表皮，平铺在载玻片上，盖上盖玻片压平，在Leica倒置显微镜下观察并拍照；

(III)在10×10倍的显微镜下观察气孔的大小及单位面积内气孔的数量，并用CameraMeasure随机测量10×40倍显微镜下30个气孔长度和宽度。