[发明专利]人源化抗基孔肯雅病毒NSP1抗体及其应用

说明书

人源化抗基孔肯雅病毒NSP1抗体及其应用，所述抗体的轻链可变区具有SEQ ID NO:1核苷酸序列和SEQ ID NO:2氨基酸序列，其中轻链超变区序列具有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；重链可变区具有SEQ ID NO:6核苷酸序列和SEQ ID NO:7氨基酸序列，重链超变区具有SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。该抗体能够特异性结合基孔肯雅病毒的NSP₁抗原。

技术领域

本发明属于基孔肯雅病毒治疗预防领域，具体涉及人源化抗基孔肯雅病毒NSP1抗体及其应用。

背景技术

基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)是一种单股正链RNA病毒，可致基孔肯雅热，虽致死率不高，但被感染人群丧失劳动力，导致严重的社会影响与经济损失。CHIKV是一种蚊媒病毒，主要由埃及伊蚊和白蚊伊蚊传播给人类，1952-1953年在坦桑尼亚首次分离，随后在非洲和亚洲地区爆发流行。2005年后CHIKV再次在全球多地数次爆发，并在法国、意大利、中国出现散在的输入性病例，特别是CHIKV东中南非型E1蛋白发生突变(E1-A226V)使其可有效通过白蚊伊蚊传播，不仅对热带和亚热带地区，还对白蚊伊蚊广泛存在的温带地区的民众构成了潜在威胁。

CHIKV感染患者染病早期主要表现为发热、头痛、肌痛、皮疹和乏力等非特异性临床症状，与登革病毒(dengue virus,DENV)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)、西尼罗病毒(west nile virus,WNV)感染早期症状相似，且几种病毒均以蚊子作为传播媒介，存在混合感染。这几种病毒感染的治疗方法不同，尤其是对CHIKV有效非甾体类抗炎药被严禁用于DENV感染，在CHIKV防控中，接种疫苗是最有效的保护人类远离疾病及限制CHIKV传播的手段之一，但是目前没有获得许可的针对CHIKV的疫苗和抗病毒药物。对CHIKV感染的急性期患者而言，休息、预防脱水、止痛和消炎等对症治疗是唯一可用和推荐的治疗方法。如广谱抗病毒药物利巴韦林对CHIKV感染的治疗有效，这些抗病毒药物可以减少感染者体内的病毒含量，降低症状的严重程度和减少病毒的传播，但是还需要更多的临床治疗结果来证实。目前尽管一些候选疫苗在进行评估，但尚没有一种疫苗获得批准。因此，基于目前尚无有效疫苗和抗病毒药物的形式，我们必须通过不同的策略研究和开发具有快速、特异等优点的免疫学治疗方法。

CHIKV属于披膜病毒科中的甲型病毒属，有包膜，直径60～70nm。内含一个长约12kb的单股正链RNA，编码6个结构蛋白(C-E3-E2-6k/TF-E1)和4个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4)。非结构蛋白主要与病毒的复制过程有关，通常CHIKV首先感染宿主皮肤的细胞，包括皮肤成纤维细胞和皮肤巨噬细胞，其中成纤维细胞时CHIKV感染的主要靶细胞，病毒进入机体后大量复制，与机体的各类细胞相互作用，诱导产生各种致病因子，参与致病过程。病毒分子致病机制研究表明，CHIKV的NSP2能够阻断Ⅰ型IFN信号，导致宿主抗病毒介质减少，这有助于病毒在机体内大量扩增，同时NSP1蛋白也有助于CHIKV的复杂，这可能是CHIKV的一种免疫逃逸机制。因此，通过抑制病毒NSP2蛋白和NSP1蛋白表达有可能控制CHIKV感染。

申请人前期以基孔肯雅病毒非结构蛋白NSP1抗原制备单克隆抗体及其人源化抗体，可作为一种方便、快速而有效的诊断与治疗手段。

发明内容

解决的技术问题：本发明提供一种人源化抗基孔肯雅病毒NSP1抗体及其应用，通过单克隆抗体技术筛选到了对NSP₁具有高度亲和力的单克隆抗体，并获取了赋予所述抗体异特性的重链和轻链可变区的氨基酸序列和核苷酸序列，获得了具有特异的抗原结合性抗体，可用于基孔肯雅病毒的诊断与治疗。

技术方案：抗基孔肯雅病毒NSP₁蛋白(Chikunguya virus,CHIKV)的杂交瘤细胞株CH001。