[发明专利]质谱方法

说明书

本发明公开了一种质谱方法。所述方法包含向样品中添加目标分析物的同位素物，并且在所述同位素物从色谱系统中洗脱时使所述样品和同位素物电离以形成前体离子。使用数据独立获取(DIA)方法质量分析所述前体离子，其包含在MS1域中执行质量分析扫描和在MS2域中执行质量分析扫描。在鉴定所述同位素物从所述色谱系统中洗脱时，所述方法另外包含执行多次目标扫描，每次目标扫描具有目标隔离窗口，所述目标隔离窗口包括在所述同位素物的色谱峰的持续时间内代表所述目标分析物的质荷比，用于所述目标分析物的鉴定和定量中的至少一个，其中所述目标扫描被配置成还提供所述目标分析物的定量数据。

技术领域

本发明涉及质谱方法和用于执行质谱方法的质谱仪。特别地，本发明涉及数据独立获取(DIA)质谱方法和用于执行所述方法的质谱仪。

背景技术

质谱为用于鉴定和定量大有机分子的通常复杂混合物的建立已久的技术。近年来，已经开发允许分析广泛范围的生物和非生物材料的技术，其应用跨越执法、环境、科学研究和生物学的领域。举例来说，在蛋白质组学方面，可分析蛋白质的简单和复杂混合物，其应用于药物发现、疾病鉴定等。

包含大量的氨基酸的蛋白质典型地具有相当大的分子量。因此，通过直接质谱测量来准确鉴定和定量蛋白质为具有挑战性的。因此，众所周知，要进行前体样品材料的碎片化。已知各种碎片化技术，其可使不同碎片离子从前体离子产生。此外，所施加的不同碎片化能量可影响碎片化机制。

样品分析可大体上分为数据依赖获取(DDA)方法和数据独立获取(DIA)方法。DDA试图确认给定样品中存在一种或多种物质。DDA方法鉴定固定数目的前体离子物质，并且经由串联质谱选择和分析那些前体离子物质。可基于强度等级(例如，如通过前体质谱(在下文被称为MS1)中的峰观测到的前十种最丰富的物质)，或通过限定碎片谱(在下文被称为MS2)总是从其获取而无论前体质谱MS1中的峰的强度等级如何的前体质谱峰的包括列表(例如由用户选择)，来确定在DDA中哪些前体离子物质为所关注的。

相比之下，DIA试图确定什么存在于潜在未知特性的样品中。为了确定未知样品分子的分子结构，可提供宽质量范围的MS1扫描和一组MS2扫描的组合。通过使所关注的质量范围(典型地由用户限定)简单地分成区段并且获得每个区段的MS2谱，DIA避免DDA中必要的决策。在DIA的情况下，对MS1前体谱的获取变得或多或少任选，因为前体选择窗口的参数本身携带关于可以的前体离子范围的信息。

DIA方法对于记录来自样品的大部分信息特别相关，并且可用于目标治疗应用。特别地，DIA方法可提供高通量、可重现和敏感的工作流程，用于从基因水平和蛋白质/肽水平分析临床标志物、癌症突变和/或序列变异。这继而有助于理解蛋白质组学研究中的疾病机制，以及提供指导临床决策的额外信息。

举例来说，GB 1701857.3(公布为GB 2559395 A)公开一种用于分析样品的质谱的数据独立获取方法。DIA方法提供MS1域(即具有前体未碎片化离子)中样品的高分辨率鉴定和定量。由于在MS1域扫描中使用相对高分辨率，因此可以区分具有低质量差异的两种不同样品分子，例如120,000的MS1扫描分辨率能够区分具有大约30ppm(每百万份)质量差异的肽。方法还以相对较低分辨率使用MS2谱循环，以基于对MS1数据的分析来提供对初步鉴定的二次确认。MS1扫描散布在整个MS2扫描中，并且设定MS1重复率(与MS2循环时间无关)，使得在色谱峰上获取足够数量的数据点，用于从色谱峰面积进行准确定量。

发明内容

根据本公开的第一方面，提供一种质谱方法。方法包含：

a)向样品中添加目标前体的同位素物；

b)在同位素物从色谱系统中洗脱时使样品和同位素物发生电离；

c)使用数据独立获取(DIA)方法质量分析样品，其包含在MS1域中执行质量分析扫描和在MS2域中执行质量分析扫描。