[发明专利]串联片段荧光互补系统及其构建方法及应用

权利要求书

1.一种基于近红外光敏色素蛋白IFP2.0的串联片段荧光互补系统，其特征在于，包括第一载体和第二载体，其中，所述第一载体为包含有序列SEQ ID NO.2的载体，所述第二载体为包含有序列SEQ ID NO.3的载体，

其中，所述序列SEQ ID NO.2用于表达IFN132-IFN132串联片段，所述序列SEQ ID NO.3用于表达IFC133-IFC133串联片段；

当所述IFN132-IFN132串联片段和所述IFC133-IFC133串联片段相互靠近时，可重构形成所述近红外光敏色素蛋白IFP2.0。

2.根据权利要求1所述的串联片段荧光互补系统，其特征在于，所述第一载体进一步包括第一基因序列，所述第一基因序列用于表达第一蛋白，所述第一载体用于表达第一融合蛋白，所述第一融合蛋白为所述IFN132-IFN132串联片段与所述第一蛋白的融合蛋白。

3.根据权利要求2所述的串联片段荧光互补系统，其特征在于，所述IFN132-IFN132串联片段为两个IFN132片段串联构成的蛋白片段，所述IFN132片段为由所述光敏色素蛋白IFP2.0第1号位至第132号位氨基酸构成的蛋白片段。

4.根据权利要求1所述的串联片段荧光互补系统，其特征在于，所述第二载体进一步包括第二基因序列，所述第二基因序列用于表达第二蛋白，所述第二载体用于表达第二融合蛋白，所述第二融合蛋白为所述IFC133-IFC133串联片段与所述第二蛋白的融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的串联片段荧光互补系统，其特征在于，所述IFC133-IFC133串联片段为两个IFC133片段串联构成的蛋白片段，所述IFC133片段为由所述光敏色素蛋白IFP2.0的第133号位至第321号位氨基酸构成的蛋白片段。

6.一种基于近红外光敏色素蛋白IFP2.0的串联片段荧光互补系统构建方法，其特征在于，包括：

以所述近红外光敏色素蛋白IFP2.0的基因序列为模板进行聚合酶链式反应(PCR)得到序列SEQ ID NO.2和序列SEQ ID NO.3；

利用第一质粒的双酶切位点，将所述序列SEQ ID NO.2插入所述第一质粒的多克隆位点；

利用第二质粒的双酶切位点，将所述序列SEQ ID NO.3插入所述第二质粒的多克隆位点，

其中，所述序列SEQ ID NO.2用于表达IFN132-IFN132串联片段，所述序列SEQ ID NO.3用于表达IFC133-IFC133串联片段；

当所述IFN132-IFN132串联片段和所述IFC133-IFC133串联片段相互靠近时，可重构形成所述近红外光敏色素蛋白IFP2.0。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括：

利用所述第一质粒的另一组双酶切位点，将用于表达第一蛋白的核苷酸序列插入所述第一质粒的另一处多克隆位点以得到第一载体，其中，所述用于表达第一蛋白的核苷酸序列位于所述序列SEQ ID NO.2的上游；

利用所述第二质粒的另一组双酶切位点，将用于表达第二蛋白的核苷酸序列插入所述第二质粒的另一处多克隆位点以得到第二载体，其中，所述用于表达第二蛋白的核苷酸序列位于所述序列SEQ ID NO.3的下游。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，

所述IFN132片段为由所述光敏色素蛋白IFP2.0第1号位至第132号位氨基酸构成的蛋白片段；

所述第一载体用于表达所述IFN132-IFN132串联片段和所述第一蛋白的融合蛋白；

所述IFC133片段为由所述光敏色素蛋白IFP2.0的第133号位至第321号位氨基酸构成的蛋白片段；

所述第二载体用于表达所述IFC133-IFC133串联片段和所述第二蛋白的融合蛋白；以及

所述第一蛋白和所述第二蛋白为相互作用蛋白，用于使所述IFN132-IFN132串联片段靠近所述IFC133-IFC133串联片段。

9.一种权利要求1-5任一项所述的基于近红外光敏色素蛋白IFP2.0的串联片段荧光互补系统的应用，其特征在于：所述近红外基于光敏色素蛋白IFP2.0的串联片段荧光互补系统应用于对活体以及活细胞内蛋白质相互作用进行成像。