[发明专利]一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法，其特征在于：所述方法包括配制稀释液、标准溶液、灵敏度溶液和样品溶液；

所述稀释液包括甲醇和水，将甲醇与水按照30:70的体积比混合均匀配制成稀释液；

所述标准溶液由左旋肉碱和稀释液制成，将左旋肉碱超声溶解后用稀释液混合均匀成混合中间标准溶液，将混合中间标准溶液用3~5倍体积的稀释液混合均匀，标准溶液配制完成；

所述灵敏度溶液由标准溶液和稀释液制成，将标准溶液用190~200倍体积的稀释液混合均匀，灵敏度溶液配制完成；

所述样品溶液由3-O-十二酰-L-肉碱样品和稀释剂制成，将3-O-十二酰-L-肉碱样品中加入稀释剂超声溶解并混合均匀。

2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：

1) 制备稀释液：将甲醇与水按照30:70的体积比混合均匀，稀释液配制完成；

2) 制备标准溶液、灵敏度溶液和样品溶液：

所述标准溶液的制备方法：称取100mg左旋肉碱，定量转移至100mL容量瓶中，超声溶解，用稀释液定容并混合均匀，混合中间标准溶液配制完成，用移液管移取10mL混合中间标准溶液至50mL容量瓶中，用稀释液定容并混合均匀，标准溶液配制完成；

所述灵敏度溶液的制备方法：移取1mL标准溶液至200mL的容量瓶中，用稀释液定容并混合均匀，灵敏度溶液配制完成；

所述样品溶液的制备方法：称取100mg3-O-十二酰-L-肉碱样品至10mL容量瓶中，加入6mL稀释液，超声溶解，定容并混合均匀，样品溶液配制完成；

3) 样品分析：液相进针量控制为稀释液2份、标准溶液6份、灵敏度溶液1份和样品溶液1份，液相色谱仪的系统适用性检测通过后采用液相色谱仪进行样品分析。

3.根据权利要求2所述的一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法，其特征在于：所述液相色谱仪的各项参数为：

仪器：型号为Agilent 1200具自动进样器的高效液相色谱仪；

色谱柱：型号为Phenomenex C18 250×3.0mm，3μm；

柱温：25-35℃；

进样量：10-15μl；

检测波长：200-240nm；

流速：0.9-1.1ml/min；

运行时间：等梯度运行25-35min；

流动相系统：缓冲液与试剂的体积比为80:20。

4.根据权利要求2或3所述的一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法，其特征在于：所述液相色谱仪的系统适用性检测要求：分离度大于等于4.0、拖尾因子为0.5~1.5，灵敏度溶液的信噪比大于等于10。

5.根据权利要求2所述的一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法，其特征在于：在方案实施过程中，所用到的试剂为色谱纯甲醇、色谱纯乙腈、色谱纯水、色谱纯缓冲盐。

6.根据权利要求2所述的一种高效液相色谱法测定3-O-十二酰-L-肉碱中左旋肉碱含量的方法，其特征在于：所述仪器还可以采用配置有DAD检测器的其他液相色谱仪。