[发明专利]一种双酚S和铅联合污染的生物模型及其建立方法

说明书

本发明提供了一种双酚S和铅联合污染的生物模型及其建立方法，属于食品安全检测技术领域；在本发明中，基于在不同浓度的双酚S和铅条件下构建了双酚S和铅联合污染的生物模型，进而验证了双酚S和铅联合污染的毒性，为双酚S和铅在的广泛应用的安全性提供试验依据；所述生物模型具有繁殖快、成本低、操作简单高效等优势。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种双酚S和铅联合污染的生物模型及其建立方法。

背景技术

双酚S（bisphenol S，BPS）是双酚A的一种代替物，广泛应用于生产生活中。研究发现，双酚S会引起运动行为障碍、生长发育不良以及脂肪累积的问题。目前，双酚类物质和金属物质的研究集中在用磁性材料来降解水中的双酚物质含量，其联合毒性并没有过多的报道。

近年来，铅作为工业原料广泛用于工业中，但是铅离子的毒性较高，且在生物体内具有较强的蓄积性。目前，仅有对双酚S和铅单独作用的毒性报道，缺乏对双酚S和铅联合毒性的相关研究。

小鼠等哺乳动物虽然与人类的发育途径高度相似，但用于构建模型时耗材较多，成本较高，且其对培养环境要求严格。秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans, C.elegans）生命周期短、培养耗材少，安全性高，在毒理学的研究领域具有很大的优势。

发明内容

针对现有技术中存在不足，本发明提供了一种双酚S和铅联合污染的生物模型及其建立方法。在本发明中，通过建立双酚S和铅联合污染的生物模型，来验证双酚S和铅联合污染的毒性，进而为双酚S和铅在的广泛应用的安全性提供试验依据。

本发明中提供了一种双酚S和铅联合污染的生物模型，所述生物模型基于在不同浓度的双酚S和铅条件下构建得到。

本发明还提供了上述双酚S和铅联合污染的生物模型的构建方法，包括如下步骤：

（1）制备含双酚S和铅的NGM培养基：

将双酚S溶于乙醇溶液中，分别配制不同浓度的双酚S溶液和铅溶液，将两者混合，将不同浓度的混合溶液和E. coli OP50再次混合后分别涂布到空白的NGM培养基；

（2）建立双酚S和铅联合污染的生物模型：

向含双酚S和铅的NGM培养基中等量分配L1期的秀丽隐杆线虫，培养至L4期时，用M9把培养基上的秀丽隐杆线虫冲洗至管中，得到秀丽隐杆线虫暴露于不同浓度双酚S和铅的下的生物模型。

进一步的，步骤（1）中，所述混合溶液中双酚S的终浓度为0.001~10μM。

进一步的，步骤（1）中，所述混合溶液中铅的终浓度为0.001~10μM。

进一步的，步骤（1）中，所述乙醇在混合溶液中的终浓度为0.1%。

进一步的，步骤（1）中，所述混合溶液和E. coli OP50的体积比为1:1。

进一步的，步骤（1）中，混合溶液与E. coli OP50的混合液的涂布总量为50μL。

进一步的，步骤（2）中，所述L1期的秀丽隐杆线虫的培养方法为：在NGM培养基表面涂布E. coli OP50，然后在培养基中接种秀丽隐杆线虫扩大培养；接着将培养后的秀丽隐杆线虫冲洗，沉淀，洗涤；接着向沉淀中依次加入M9、NaClO和NaOH，震荡得秀丽隐杆线虫虫卵，孵育虫卵，获得处于L1期的秀丽隐杆线虫。

进一步的，步骤（2）中，所述培养的条件为：在20℃下培养48h。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明中选用秀丽隐杆线虫来构建模型，秀丽隐杆线虫具有易于培养、繁殖快、成本低等优势，且其作为模式生物在进行毒理学研究时可以很大程度的反映物质对人体的伤害。