[发明专利]一种间充质干细胞来源的抗炎症氧化脂质组合物的制备方法

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞来源的抗炎症氧化脂质组合物的制备方法，该方法采用免疫激活的外周血单个核细胞（PBMCs）或其条件培养基模拟炎症微环境激活MSCs，再外加合成氧化脂质所必需的底物，即可显著促进间充质干细胞大量合成和分泌氧化脂质。本发明制备的氧化脂质组合物来源于间充质干细胞，具有重要的生物学功能，可以降低炎症反应，可用于炎症性疾病的预防和治疗，加速组织修复和愈合。相对于干细胞疗法，该氧化脂质组合物性质稳定，易于保存运输，同时也可避免发生免疫排斥反应和肿瘤形成风险等问题，简单易行且安全有效，极其适合于临床研究和应用，也为基于间充质干细胞的抗炎症非细胞疗法提供了新思路和新选择。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种间充质干细胞来源的抗炎症氧化脂质组合物的制备方法。

背景技术

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，具有分化成骨、软骨、脂肪和其他类型细胞的潜能。间充质干细胞来源于中胚层，最早发现于骨髓，还可从脂肪、脐血、羊水、牙体等组织中分离出来。近年来，随着研究的进展，发现间充质干细胞除具有自我复制和多向分化潜能外，还具有免疫调节作用。基于间充质干细胞的免疫炎症调节作用，有关间充质干细胞在治疗移植物抗宿主反应、自身免疫性疾病的临床研究越来越多。

间充质干细胞对适应性免疫和固有免疫都有较强的免疫抑制作用。间充质干细胞对适应性免疫的抑制作用主要表现在对T淋巴细胞和B淋巴细胞的免疫抑制作用，对固有免疫的抑制作用主要表现在对单核细胞/巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞的免疫抑制作用。但是，随着对间充质干细胞临床研究的不断深入，研究者发现移植入体内的间充质干细胞分化成组织细胞的几率很低且移植到体内后存在存活率低及长期临床应用可能存在致瘤隐患，并且MSCs活细胞产品保存和运输困难等不足使得其临床应用受到限制，因此，寻找一种操作简单、安全有效的基于MSCs的非细胞疗法显得十分重要。

进一步的研究发现，MSCs并非本身就具备免疫抑制特性，而是需要在炎症微环境受到刺激活化后才能够发挥抗炎和免疫抑制作用，其抗炎作用的发挥主要是通过其旁分泌作用实现的。目前，关于间充质干细胞分泌的活性物质的应用，主要集中在MSCs总提取物、上清液等。如发明专利CN201710346752.7采用人间充质干细胞外泌体提取物治疗褥疮，能够深入皮肤基底层促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，促进创面愈合，减少损伤组织的细菌感染及炎症反应。发明专利CN202010386308.X采用包括间充质干细胞培养上清液的组合物可促进皮肤伤口愈合的组合物，可以降低炎症反应，加速皮肤伤口愈合，避免瘢痕增生现象。

氧化脂质是指多不饱和脂肪酸（花生四烯酸、亚油酸、α-亚麻酸、DHA、EPA、DGLA等）发生自动氧化或者是在特定酶（COX、LOX、CYP450）的作用下生成的一系列氧化代谢产物，在机体炎症反应、免疫防御、内分泌调节以及氧化应激等方面发挥着重要作用。已有研究表明，氧化脂质是MSCs在炎症过程中合成的重要调控介质之一，在炎症的发起和消退过程中发挥关键作用。以往的研究结果提示，前列腺素E2（PGE2）是MSCs在炎症状态下合成的最主要的氧化脂质，但是新近的研究结果显示，PGE2（或者说AA通路下）有着复杂的代谢通路和众多的活性代谢产物（氧化脂质），其中数种已被证实具有抗炎和免疫调节活性，尤其以15-LOX代谢产物研究最多，但是目前对间充质干细胞来源的抗炎性氧化脂质的功能和应用尚缺乏深入研究。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种间充质干细胞来源的抗炎症氧化脂质组合物的制备方法，解决现有MSCs活细胞疗法存在性质不稳定，不易保存运输、有发生免疫排斥反应和肿瘤形成风险等问题，并且为MSCs的非细胞疗法提供了新选择。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种间充质干细胞来源的抗炎症氧化脂质组合物的制备方法，包括如下步骤：

1）分离并培养获得间充质干细胞；