[发明专利]一种用于人体维生素B12含量检测的释放剂及其应用

说明书

本发明为一种用于人体维生素B12含量检测的释放剂及其应用，包括变性剂R1和中和剂R3；变性剂R1为Tris‑Hcl体系强碱溶液，中和剂R3为Tris‑Hcl体系的无水乙醇、三(2‑羧乙基)膦溶液。本发明提供的维生素B12释放剂通过变性剂R1强碱溶液从结合蛋白中解离维生素B12，然后在中和剂R3的作用下实现磁微粒化学发光检测，B12释放剂与对应的检测试剂及检测方法，可有效、完全的释放样本中的维生素B12，检测结果灵敏度高，能够检测到低浓度维生素B12，重复性好，性能能达到国际产品的水平。并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床应用。

技术领域

本发明涉及医用体外免疫诊断试剂领域，具体是一种用于血清或肝素血浆中维生素B12含量检测的释放剂的制备，应用于一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体维生素B12含量的磁微粒化学发光检测试剂。

背景技术

维生素B12，又名氰钴胺素，是一种一个钴原子周围的有四个吡咯环的类咕啉化合物，分子量为1355。钴胺素主要来源于动物产品，如肉、蛋、牛奶和其他乳制品。人体吸收维生素B12需要借助一种胃肠道分泌物(内因子)，维生素B12和这种蛋白质附着在回肠黏膜上的受体形成一种复合体，在回肠粘膜上一种被称为运钴胺素的蛋白质将维生素B12从黏膜细胞中转移到血液和组织中。除储存在骨髓以及其他组织外，大多数维生素B12被储存在肝脏。如果需要，它们就会由B12结合蛋白质(转钴胺)承载并释放到血浆中去。

维生素B12在体内以辅酶的形式存在，可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢；其和叶酸一样都是正常DNA(脱氧核糖核酸)合成中所不可或缺的，具有活化氨基酸的作用和促进核酸的生物合成，可促进蛋白质的合成，它对婴幼儿的生长发育有重要作用；促进红细胞的发育和成熟，使肌体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血，维护神经系统健康；参与新陈代谢，是神经系统功能健全不可缺少的维生素，并参与神经组织中一种脂蛋白的形成。

Vitamin B12和叶酸是通过蛋氨酸合成的反应路径连接的，所以两者中任何一样缺乏都会扰乱代谢途径，导致同样的症状和医学问题。在临床上维生素B12常与叶酸、同型半胱氨酸、铁蛋白等联合检测，用于对糖尿病、贫血症等进行临床分析。大量的研究表明维生素B12贫乏也是巨幼红细胞性贫血症的诱因，同时也与老年痴呆症、抑郁症以及冠心病等有关。维生素B12缺乏也是怀孕早期流产、反复性流产的危险因素之一。人体缺乏维生素B12时易造成神经系统不可逆损害，引起烦躁不安、记忆衰退等症状。过量的摄入可能会出现哮喘、荨麻疹、湿疹、面部浮肿、寒颤等过敏反应，也可能引发神经兴奋、心前区痛和心悸；也有报道认为过量可能会促进肿瘤发生。因此临床上建议对该类维生素做到先检测再补充，不缺乏不补充。

目前，定量测定VB12的方法，有微生物学法，高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)以及放射免疫法(RIA)。维生素B12在体内是与蛋白结合而存在的，所以在检测血清或血浆等生物样本时，需要对样本进行前处理，使其将维生素B12由结合蛋白上释放出来，再进行检测。现有问题是对样本进行前处理时解离不彻底，导致检测结果不准确，且不能够检测到低浓度维生素B12水平，重复性较差，无法形成统一标准。

发明内容

本发明旨在阐述一种高效、简单、快速的用于人血清或肝素血浆中维生素B12含量检测的释放剂，并应用于相应的免疫检测方法中，以解决现有产品释放不完全、重复性差的技术问题。

基于上述目的，本发明提供一种用于人血清或肝素血浆中维生素B12含量检测的释放剂，包括变性剂R1和中和剂R3；变性剂R1为Tris-Hcl体系强碱溶液，中和剂R3为Tris-Hcl体系的无水乙醇、三(2-羧乙基)膦溶液。

所述变性剂R1的pH值为12.0～13.0，包括：Tris-Hcl，浓度为7.5～8.2g/L；氢氧化钠，浓度为20.0-22.0g/L。