[发明专利]TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用

说明书

TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用，属于小鼠模型构建领域，包括：将TfR1^‑/‑和Sftpc‑CreERT2小鼠杂交；将F1代TfR1^+/‑；Sftpc‑CreERT2转基因小鼠和F1代TfR1^+/‑转基因小鼠杂交，得到F2代，基因型分别为TfR1^+/‑；Sftpc‑CreERT2、TfR1^+/+；Sftpc‑CreERT2和TfR1^+/+；将F2代TfR1^+/‑；Sftpc‑CreERT2转基因小鼠杂交，得到F3代TfR1^‑/‑；Sftpc‑CreERT2纯合子基因敲除小鼠。本发明为深入研究TfR1在肺组织疾病和肺癌发病过程中的作用提供了坚实的研究基础。

技术领域

本发明属于小鼠模型构建技术领域，具体涉及TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用。

背景技术

转铁蛋白受体1(Transferrinreceptor 1，TfR1)，也被称为CD71，是一些细胞吸收铁所必需的膜蛋白，但并不是所有的细胞类型吸收铁都需要的膜蛋白。转铁蛋白(Tf)是TfR1的配体，能携带细胞外的铁。Fe²⁺-Tf/TfR1通过受体介导的内吞作用内化并转运至核内体，在核内体低pH环境中，铁从Tf释放出来，并通过跨膜蛋白离开核内体。这种转运是由二价金属转运体(DMT1/SLC11A2)介导的。摄入的铁可以被血红素或铁硫簇直接利用，也可被储存在铁蛋白中。转铁蛋白受体1(Transferrin receptor 1，TfR1)与肺癌细胞内铁含量的调节有关。有研究发现，肺癌细胞与正常细胞相比，TfR1表达水平显著升高。在人类结节病、过敏性肺炎、间质性肺病中均检测到了TfR1的表达水平异常。在小鼠的肺纤维化模型中，也证实了肺组织中存在TfR1的高表达。然而，TfR1在肺部疾病，尤其是肺癌发病过程中的调控机制还不完全清楚。目前关于肺组织中TfR1的功能研究主要集中在细胞实验方面，这可能与缺少稳定的动物模型有关。因此，迫切需要构建出一种稳定的动物模型，以便更好的研究TfR1在肺组织中以及肺癌发病过程中的作用和机制。

发明内容

本发明的目的是提供一种TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型及其构建方法和应用，以便深入研究TfR1在肺组织中以及肺癌发病过程中的作用和机制。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：

步骤一、将TfR1^-/-转基因小鼠和Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，得到F1代，经鉴定，基因型分别为TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2和TfR1^+/-；

步骤二、将F1代TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠和F1代TfR1^+/-转基因小鼠进行杂交，得到F2代，经鉴定，基因型分别为TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2、TfR1^+/+；Sftpc-CreERT2和TfR1^+/+；

步骤三、将F2代TfR1^+/-；Sftpc-CreERT2转基因小鼠进行杂交，经鉴定，得到F3代TfR1^-/-；Sftpc-CreERT2纯合子基因敲除小鼠，即TfR1肺组织特异性敲除小鼠模型。

作为优选的实施方式，步骤一中，F1代小鼠基因型鉴定过程如下：

(1)PCR

TfR1^-/-转基因小鼠基因型鉴定引物序列如下：

TfR1^-/-F：TTCAGTTCCCAGTGACCACA；