[发明专利]检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法及其试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法及其试剂盒和应用。该ELISA方法包被抗原为重组OmpA蛋白，该重组OmpA蛋白氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示序列；核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2所示序列。该方法具有良好的反应原性、特异性、敏感性和重复性，可以用于临床鸭疫里默氏杆菌血清抗体检测，可以高效检测养殖场鸭疫里默氏杆菌抗体，从而防控鸭疫里默氏杆菌感染的爆发。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法及其试剂盒和应用。

背景技术

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)感染是家鸭中主要的细菌性传染病之一，以纤维素性心包炎，气囊炎，肝周炎和干酪性输卵管炎为特征的传染性败血症为临床特征，病死率高达90％。且RA血清型复杂，目前被报导的就有21种血清型，并且各个血清型之间交叉保护性缺乏，而疫苗防控多是针对单一或少数血清型，致使部分流行血清型不明地区难以得到有效防控。RA感染的临床症状并没有特异性，仅凭症状难以将RA与这些细菌病原体(包括大肠杆菌，肠道沙门氏菌和多杀巴氏杆菌)的感染进行区分，同时，临床广泛使用抗生素，成本激增，也诱导了耐药菌株的出现，这些都给RA的临床诊断与防控带来极大的困难，经济损失惨重。

RA感染在我国水禽养殖区域时常爆发，RA疫苗接种愈发广泛，针对养殖场及基层兽医检疫部门技术欠缺，设备简单的现状，须创建一种简便高效的抗体检测方法，监测RA抗体水平，来防控鸭疫里默氏杆菌感染的爆发。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法及其试剂盒和应用，以便高效的检测和监测鸭疫里默氏杆菌抗体水平，从而防控鸭疫里默氏杆菌感染的爆发。

根据本发明的一个方面，提供了检测鸭疫里默氏杆菌抗体的ELISA方法，该ELISA方法的包被抗原为重组OmpA蛋白，该重组OmpA蛋白氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示序列；该重组OmpA蛋白核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2所示序列。

在某些实施方式中，作为包被抗原的该重组OmpA蛋白的氨基酸序列包含与SEQ IDNO：1具有至少90％同源性的序列；该重组OmpA蛋白核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少90％同源性的序列。

在某些实施方式中，作为包被抗原的该重组OmpA蛋白的氨基酸序列包含与SEQ IDNO：1具有至少95％同源性的序列；该重组OmpA蛋白核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同源性的序列。

在某些实施方式中，作为包被抗原的该重组OmpA蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示序列；该重组OmpA蛋白核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示序列。

在某些实施方式中，作为包被抗原的该重组OmpA蛋白基因序列扩增引物序列如下：

OmpAcut-up(SEQ ID NO：3)：5’-ATGAACAGAGATAAGGATAAAGATGGAGT-3’；

OmpAcut-dw(SEQ ID NO：4)：5’-TTATTGAACTGCATACGCTTCCTGAGGCTT-3’。

在某些实施方式中，所述ELISA方法包括如下步骤：

1)用重组OmpA蛋白作为包被抗原：

该重组OmpA蛋白氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示序列，核苷酸序列包括如SEQID NO：2所示序列；

或该重组OmpA蛋白氨基酸序列包含与SEQ ID NO：1具有至少90％同源性的序列，核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少90％同源性的序列；