[发明专利]用于基于大小回收稀有细胞的以柱为基础的装置和方法，及其用途

权利要求书

1.一种用于从样品捕获和回收细胞的设备，其包括至少一个柱，所述柱包括：

(i)界定内腔室的内壁，所述内腔室在所述柱的第一端具有用于接收所述样品的入口开口，并且在所述柱的第二端具有出口开口；

(ii)在所述内腔室内部邻近所述柱的所述第二端安置的穿孔塞；

(iii)在第一端具有开口并且在第二端具有开口的套筒插入物，所述套筒插入物包括在所述第二端逐渐变细的通道并且安置在所述内腔室内，其第二端邻近所述穿孔塞；和

(iv)容纳在所述套筒插入物内的过滤部件，所述过滤部件包括夹在两个密封部件中间的筛。

2.根据权利要求1所述的设备，其包括一个柱，或者两个或更多个柱；

其中，任选地，所述柱的所述第二端适于连接到一个或多个泵，所述泵用于控制通过所述柱的所述样品的流动速率，

其中，任选地，所述泵适于在选自由以下组成的组的流动速率下传递所述样品：至少约0.05mL/min、至少约0.10mL/min、至少约0.15mL/min、至少约0.20mL/min、至少约0.25mL/min、至少约0.30mL/min、至少约0.40mL/min和至少约0.50mL/min；

其中，任选地，所述筛包括非细胞粘附性材料，

其中，任选地，所述非细胞粘附性材料选自由硅、二氧化硅、氮化硅、基于环氧基的负型光刻胶和陶瓷组成的组，

其中，任选地，所述基于环氧基的负型光刻胶包括SU-8，以及

其中，任选地，所述筛包括多个孔，所述孔的直径选自由以下组成的组：至少约6μm、至少约7μm、至少约8μm、至少约9μm、至少约10μm、至少约12μm、至少约14μm、至少约16μm、至少约18μm和至少约20μm。

3.一种用于从样品捕获和回收细胞的方法，其包括以下步骤：

(a)将所述样品引入根据权利要求1或2所述的设备的所述入口开口以允许所述样品流过所述设备的所述套筒插入物和过滤部件；和

(b)收集在所述设备的所述过滤部件中的所述筛的表面上保留的残余物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述样品包括生物流体，任选地，所述生物流体选自由以下组成的组：全血、血清、血浆、脑脊髓液、淋巴液、囊液、痰、粪便、胸腔积液、黏液、腹水和尿，

其中，任选地，所述样品包括单细胞，

任选地，所述单细胞选自由疑似癌细胞、疑似肿瘤来源细胞、疑似来源于胚胎或胎儿的细胞、和来自病原生物体的细胞组成的组；或者

所述样品包括多个细胞，其中所述多个细胞中的至少一些任选地选自由以下组成的组：疑似癌细胞、疑似肿瘤来源细胞、疑似来源于胚胎或胎儿的细胞、和来自病原生物体的细胞；

其中，任选地，所述多个细胞中的两个或更多个形成细胞簇；

其中，任选地，所述单细胞或所述多个细胞中的至少一些是多核的；

其中，任选地，所述样品是血液样品，且从其捕获和回收的细胞包括至少两个明显区别的核，

其中，任选地，所述细胞的主轴是至少10μm；

其中，任选地，所述细胞表达选自由PECAM1、VWF和CDH5组成的组的基因；

其中，任选地，所述细胞不表达选自由PTPRC、ITGA2B和GP1BA组成的组的基因；以及

其中，任选地，收集步骤(b)中的所述残余物包括使用移液管回收所述残余物。

5.一种用于在受试者的样品中检测具有以下特征的分离细胞群体的方法，

(i)是来源于肿瘤并且分离自血液的内皮细胞；

(ii)每个细胞都具有至少两个明显区别的核；

(iii)每个细胞都具有大于约10μm的主轴；

(iv)表达内皮细胞基因或蛋白质；

(v)不表达白细胞特异性基因或蛋白质；和

(vi)不表达巨核细胞或血小板特异性基因或蛋白质；

所述方法包括：

(a)使用根据权利要求1或2所述的设备或根据权利要求3或4所述的方法从所述样品捕获和回收所述细胞。