[发明专利]一种从血清或血浆中提取外泌体的方法

权利要求书

1.一种从血清或血浆中提取外泌体的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

血清以2000×g，4℃，离心20min，去除细胞碎片沉淀，保留上清液；

将步骤1）中得到的上清液以30000×g，4℃，离心20min，仔细吸出上清液保留；

将步骤2）中得到的上清液通过截留分子量为3KD的滤膜，收集滤液；

向步骤3）中得到的滤液中加入沉淀剂，混匀，放置于2-8℃环境中孵育30-60min；所述的沉淀剂：滤液的重量分数比为：3-6:1；所述的沉淀剂采用PEG2000、重水、聚乙烯醇(PVA）、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）、共聚维酮S-630、羧甲基纤维素（CMC）、海藻酸钠一种或几种的混合物；

将步骤4）中孵育好的样品，置于120000×g，4℃，超速离心90-120min，弃上清液，保留沉淀；

将步骤5）中得到的沉淀以100ulPBS重悬，分装，储存于-80℃备用。

2.权利要求1所述的从血清或血浆中提取外泌体的方法，其中所述的步骤4）中的沉淀剂：滤液5:1。

3.权利要求1所述的从血清或血浆中的提取外泌体的方法，其中所述的步骤4）中几种沉淀剂的混合物指的是两种沉淀剂的混合物为：PEG20000和聚乙烯醇(PVA）；PEG20000和聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）；PEG20000和共聚维酮S-630；聚乙烯醇(PVA）和羧甲基纤维素（CMC）；聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）和共聚维酮S-630；当沉淀剂的混合物由两种沉淀剂混合而成时，两种沉淀剂的混合比例为50:1~1:50；

三种沉淀剂的混合物为：PEG20000、聚乙烯醇(PVA）及共聚维酮S-630；

PEG20000、聚乙烯醇(PVA）及聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）；

聚乙烯醇(PVA）、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）及共聚维酮S-630；

聚乙烯醇(PVA）、共聚维酮S-630及羧甲基纤维素（CMC）；

三种沉淀剂的混合比列为1:1:1~1:15:15。

4.权利要求1所述从血清或血浆中提取外泌体方法在提高外泌体提取效率方面的应用。