[发明专利]一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，涉及体外诊断技术领域，本发明包括辣根过氧化物酶标记的生物标志物抗体溶液、抗生物标志物抗体包被的酶标板、浓缩洗液、发光底物液、校准品和质控品，并公开抗生物标志物抗体包被的酶标板的制备方法。发明的有益效果在于：在化学发光免疫分析基础上，引入具有抗生物标志物抗体包被的酶标板，改进抗生物标志物抗体包被工艺，提高反应的灵敏度，简化了试剂生产流程，缩短了生产时间，为市场提供质优价廉、稳定可靠、重复性好、批间差小、准确度高的检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒及检测方法。

背景技术

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。是德国医生阿尔茨海默最先发现的一种脑神经疾病。它的主要症状有两个:一是β-淀粉样蛋白在神经元细胞外异常沉积形成的老年斑，二是tau蛋白的异常磷酸化所形成的NFTs(神经元纤维缠结)，严重影响患者的生活与社交功能，严重影响患者及至亲的生活质量。AD的病因及发病机制尚未明了，特征性病理改变为β-淀粉样蛋白沉积形成的细胞外老年斑和tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结，以及小胶质细胞增生性神经炎和神经元丢失。这些主要的病理改变目前仍然是AD神经病理学诊断的标准。血清中的Aβ蛋白和tau蛋白可以作为AD临床实验室诊断的生物标志物。

Tau蛋白是一种微观相关蛋白，主要分布在神经元，其次是在神经胶质细胞。正常情况下，转录后的tau发生磷酸化修饰有利于微管的稳定。但过度磷酸化则可导致神经组织内各种类型的细胞骨架变形、聚集，进而丧失正常的功能。Tau蛋白有多余45个磷酸化位点，其中大多位于脯氨酸富集区(即磷酸化位点富集区，大多为172-251位点区域)和C-末端尾区(大多位于368-441位点区域)。在tau蛋白这些区域的过度磷酸化可影响它与微管结合的能力。更为严重的是，tau蛋白的过度磷酸化可促进和增强tau蛋白的聚集。许多证据表明，在阿尔兹海默病及其他tau蛋白引起的病例过程中tau蛋白的过度磷酸化可能发生在最早起。Tau蛋白作为一种重要的微管相关蛋白，其异常修饰在神经退行性疾病中起重要的作用，对tau蛋白的相关功能及调控机制进行深入的研究可能为了解神经退行性疾病的临床和病理生理机制提供某些新的思路，为此类疾病的早期诊断和治疗提供一定的依据。

β淀粉样蛋白(amyloid-β，Aβ)是由淀粉样前体蛋白(amyloid precursorprotein，APP)经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39～43个氨基酸的多肽。

目前全球有超过5000多万的人患有痴呆。国际工作组(IWG)及美国国家老龄问题研究所修订了新的IWG诊断标准，即IWG-2诊断标准，发表于《Lancet Neurology》杂志上，这是目前为止最新的AD诊断标准。IWG-2诊断标准首次将AD生物标志物分为诊断标志物和进展标志物。脑脊液β-淀粉样蛋白和Tau、淀粉样蛋白正电子发射型计算机断层显像(positron emission tomography，PET)和AD致病基因携带为AD的诊断标志物。然而，CSF和PET检查过于“高大上”，很难在大众群体中被普及，也很难被大众所接受。因此，寻找更加“接地气”的检测方法至关重要。

为了提高阿尔茨海默病诊断水平和改善治疗效果，从检测角度上来说，公开号为CN109212225A的专利申请公开用层析的方法发明了一种磷酸化Tau蛋白检测试剂条过，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端。

目前应用较多的为化学发光技术，其中化学发光技术兴起于上个世纪80年代，是继酶联免疫技术和放射性免疫技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定。如公开号为CN 109580955 A的专利申请公开用于检测Tau蛋白(TAU)的磁微粒分离化学发光免疫测定法，检测方法更准确、方便快捷。但是现有技术中试剂盒的稳定性较差。

发明内容