[发明专利]一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：包括辣根过氧化物酶标记的生物标志物抗体溶液、抗生物标志物抗体包被的酶标板、浓缩洗液、发光底物液、校准品和质控品；

所述抗生物标志物抗体包被的酶标板的制备方法包括以下步骤：

(1)往包被液中加入抗生物标志物抗体溶液至终浓度为2-4ug/ml；

(2)将步骤(1)中的溶液加入酶标板中进行恒温包被后，去除包被液，加入封闭液进行封闭；所述封闭液包括0.1M pH 7.4的PBS缓冲液，所述PBS缓冲液中包括1wt％BSA、0.1vol％Proclin300、0.1vol％动物血清、1％wt％鱼皮明胶、10％wt％蔗糖；

(3)去除封闭液，干燥后，即获得抗生物标志物抗体包被的酶标板。

2.根据权利要求1所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述包被液为0.01M的碳酸缓冲液，所述碳酸缓冲液的pH值为9.6±0.1。

3.根据权利要求1所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述动物血清为羊血清。

4.根据权利要求1所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述步骤(2)中包被温度为37±1℃，包被时间为1～3小时。

5.根据权利要求4所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述步骤(2)中封闭温度为37±1℃，封闭时间为2～5小时。

6.根据权利要求5所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述步骤(3)中干燥温度为37±1℃，干燥时间为2～4小时。

7.根据权利要求1所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的生物标志物抗体溶液的制备方法包括以下步骤：

(1)将辣根过氧化物与NaIO₄混合，形成醛化酶；

(2)然后加入生物标志物抗体，形成斯夫氏硷；

(3)然后加入NaBH₄还原生成稳定的辣根过氧化物酶标记的生物标志物抗体溶液。

8.根据权利要求1所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述抗生物标志物抗体包被的酶标板的包被浓度为0.5-4.0ug/ml。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒，其特征在于：所述阿尔兹海默病的生物标志物为p-Tau-181蛋白或Aβ1-42蛋白。

10.如权利要求1-8中任一项所述的试剂盒的检测方法，其特征在于：

(1)将校准品、质控品、待测样本依次加入抗生物标志物抗体包被的酶标板中，用膜封闭微孔反应板，置于37℃孵育1h；

(2)用浓缩洗液对孵育后的微孔反应板进行清洗；

(3)每孔加入辣根过氧化物酶标记的生物标志物抗体溶液，加完以后，用膜封闭微孔反应板，置于37℃环境孵育1h；

(4)重复步骤(2)的洗板步骤，然后每孔加入发光底物液，在5min内用化学反发光仪器测量各孔的发光强度值。