[发明专利]幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用

说明书

本发明提供了幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗及制备方法与应用，属于生物医学及生物工程领域。本申请提供的幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗GEM‑SAM^E‑FVpE，主要是将含有核心组件SAM^E和幽门螺旋杆菌毒力因子多表位肽FVpE的重组抗原SAM^E‑FVpE展示在GEM颗粒表面制备而成，具有良好的抗原表面展示性质。幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗GEM‑SAM^E‑FVpE同时具有良好的胃肠道M细胞靶向性，可高效地将重组抗原SAM^E‑FVpE靶向递送给胃肠道M细胞，激发胃肠道产生针对幽门螺旋杆菌多种毒力因子的特异性黏膜免疫应答。幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗GEM‑SAM^E‑FVpE可应用于防治幽门螺旋杆菌相关性胃病。

技术领域

本申请涉及生物医学及生物工程领域，具体而言，涉及幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗。

背景技术

幽门螺旋杆菌（Hp）是胃炎、胃溃疡和胃癌的重要致病因子，世界感染率超过50%，我国Hp感染率高达58.07%，且呈现明显的家庭聚集性，形式更加严峻。目前，临床治疗Hp感染性胃病的方法主要是多联抗生素疗法，但是面临着抗生物导致Hp耐药性、治疗后再感染、抗生素破坏肠道微生态平衡、药物毒副作用和病人依从性差等问题，难以在Hp感染人群中大规模推广使用，研发有效的Hp疫苗具有很好的应用前景。

口服类疫苗的免疫原性一般较弱，需使用大量抗原多次接种，且免疫应答持续时间较短，容易产生免疫耐受。微皱褶细胞（M细胞）是胃肠道黏膜免疫系统中一种特化的抗原转运细胞，散布于黏膜上皮细胞间，能将抗原从胃肠腔内转运到上皮下的淋巴组织，诱导黏膜免疫反应。M细胞是胃肠道黏膜免疫系统的“入口”，其对抗原的摄取是启动胃肠黏膜免疫应答关键的第一步。因此，“抗原能否被M细胞大量摄取”是口服类疫苗免疫成败的关键所在。利用“与M细胞表面受体相结合的M细胞靶向肽”，将抗原靶向递呈给M细胞，增加其对抗原的摄取和转运效率，激发高水平黏膜免疫应答，是一种提高口服类疫苗免疫效果的有效策略。

口服类疫苗在激发胃肠道黏膜免疫应答和特异性细胞免疫应答具有一定优势，但是直接口服给药，疫苗效果往往甚微，其中主要原因是：胃肠道中存在大量的酸和蛋白水解酶，会破坏疫苗抗原。因此，研究安全有效的黏膜免疫投递系统是口服类疫苗研究领域的一个热点。乳酸菌是一群在人体肠道内的常见益生细菌，作为口服类疫苗的黏膜免疫投递系统，具安全性高等独特优势。另外，将抗原展示在乳酸菌表面更符合黏膜疫苗的要求。锚定蛋白是细菌表面展示技术中的核心组件。N-乙酰胞壁质酶（AcmA）是在乳酸菌表面展示系统中常用的一种锚定蛋白。然而，在胞内表达的AcmA往往跨膜转运活性不强。基于AcmA设计更为有效的乳酸菌细胞表面展示系统，仍是一项亟待研究的工作。

发明内容

本申请的第一方面，公开了幽门螺旋杆菌四价毒力因子GEM颗粒疫苗，GEM颗粒疫苗包括在GEM颗粒表面展示重组抗原SAM^E-FVpE；重组抗原SAM^E-FVpE含有核心组件SAM^E和幽门螺旋杆菌毒力因子多表位肽FVpE。

GEM颗粒表面展示技术是一种基于革兰氏阳性增强基质颗粒（即GEM颗粒）的非活性、非遗传修饰的新型乳酸菌表面展示技术，称之为GEM颗粒表面展示技术，又叫细菌样颗粒表面展示技术。GEM颗粒表面展示技术主要利用热酸处理乳酸菌，去除蛋白质和核酸等大分子物质，制备仅含有细胞壁肽聚糖骨架的空心颗粒，叫GEM颗粒；将高纯度疫苗抗原与GEM颗粒混合，疫苗抗原通过与其偶联的锚定蛋白展示在GEM颗粒表面，制备的疫苗叫GEM颗粒疫苗，又叫细菌样颗粒疫苗。