[发明专利]一种用生物荧光法检测燃油中微生物的方法及其专用检测棒

说明书

本发明提供一种用生物荧光法检测燃油中微生物的方法及其专用检测棒。本发明的检测方法采用三磷酸腺苷双磷酸酶、腺苷磷酸脱氨酶和硫酸铜的混合物作为游离ATP去除剂，能够有效去除样品中的游离ATP；采用十八烷基三甲基氯化铵作为细胞裂解剂，裂解速度快、完全、并能够使剩余的ATP水解酶不可逆地失活；荧光素酶为冻干粉，常温保存即可，节约储存成本；本发明的专用配合检测棒杆部采用螺纹设计，保证结果的稳定性和一致性；检测管内含有荧光聚集反应球，用于聚集荧光信号，提高检测的灵敏度、稳定性和准确性。

技术领域

本发明涉及一种用于ATP生物荧光法快速检测燃油样品中微生物的检测棒制备方法与测定方法，属于生物化学分析检测领域。

背景技术

据统计，50％的发动机故障是由燃料的洁净性不良引起的。微生物是影响燃料洁净性的一个重要因素，对燃料的储存和运行安全有重大影响。自1930年以来，人们逐渐认识到燃料中微生物生长繁殖所带来的一系列危害，燃料的微生物污染问题开始受到关注。微生物污染是航空工业、航海工业及运输行业的主要威胁，大量的微生物、微生物分泌物凝结成粘稠的团状或絮状物能够堵塞油滤、油泵、燃油调节器和其它附件，直接影响发动机的正常供油，影响运行安全；微生物产生的分泌物能够对机器结构造成腐蚀，破坏油箱铝合金结构的表面保护层和密封胶，防护涂层一旦遭到破坏，便会使基体金属进一步被腐蚀，穿透油箱壁板，导致油箱渗漏；微生物污染还能导致油量指示设备故障，指示器读数不准确。因此，控制燃料中的微生物污染状况非常必要，而对燃料进行微生物检测则是控制微生物污染的重要手段。

燃料中微生物的检测方法主要包括菌落培养法、间接检测方法和ATP生物荧光法。菌落培养法准确性高，不需要昂贵复杂的专业设备，培养成本较低，但是该方法操作复杂，检测时间长，通常需要4天时间，不能实现实时监控，且对操作人员的要求较高，需要严格的无菌环境；间接法主要通过检测燃料性能指标的变化，如外观、铜片腐蚀、固体颗粒物、水分、pH、酸碱度、表面张力等，间接反应燃料是否受到微生物污染，这类方法准确度较差、灵敏度较低；ATP生物荧光法通过测定燃料中ATP的含量判断微生物的污染情况，ATP是包括细菌和真菌在内的所有生物细胞最主要的能量转运分子，其含量与活菌量成一定正比，因此，ATP的存在是判断燃料微生物污染程度的可靠指标。ATP方法准确度和灵敏度高，操作简单快速，可在10分钟内得出结果，可以实现油箱、储油罐的在线检测，该方法已经在国际上得到航空公司的广泛应用。

现有的采用ATP方法的燃料微生物检测笔样品处理复杂，操作步骤较繁琐，且无法直接检测微生物细胞中的ATP，需分别测定总ATP含量和游离ATP含量，两者之差方为微生物细胞中的ATP；同时鉴别性较差；另外，现有的燃料微生物检测笔成本较高。

基于上述情况，亟待开发一种以生物荧光反应为基础，高效去除检测样品中的游离ATP，又能有效释放出微生物细胞中的ATP，裂解速度快的检测方法，同时，针对现有技术中的检测棒检测灵敏度低，准确性不高的缺点，开发出一种专适用于以生物荧光反应为基础的燃料微生物检测棒，使其荧光反应集中且稳定，

ATP的含量越高,且ATP含量与相对发光单位(RLU)成正比，因此微生物的含量越高，相对发光单位越高；其二，三磷酸腺苷双磷酸酶、腺苷磷酸脱氨酶和硫酸铜的混合物能够有效去除样品中的游离ATP；其三，十八烷基三甲基氯化铵十八烷基三甲基氯化铵能够有效裂解微生物细胞，释放出微生物细胞中的ATP，裂解速度快、完全、并能够使剩余的ATP水解酶不可逆地失活；其四，荧光素酶为冻干粉，常温保存即可，节约储存成本；其五，检测棒杆部采用螺纹设计，结果更稳定；其六，检测管中含有荧光聚集反应球，能够使荧光集中在反应球表面，提高检测灵敏度、稳定性和准确性。

发明内容

弥补了传统燃料微生物检测方法的不足，本发明提供一种用于ATP生物荧光法快速检测燃油样品中微生物的方法，消除样品中游离ATP的影响，提高检测速度、灵敏度、精密度和准确性。

本发明的目的在于提供一种用于ATP生物荧光法快速检测燃油中微生物的检测方法及其专用检测棒。