[发明专利]用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法和应用有效
申请号: | 202011082030.3 | 申请日: | 2020-10-12 |
公开(公告)号: | CN114354772B | 公开(公告)日: | 2023-10-24 |
发明(设计)人: | 李国卫;何民友;胡绮萍;邱韵静;陈向东;魏梅;孙冬梅;吴文平;程学仁 | 申请(专利权)人: | 广东一方制药有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72 |
代理公司: | 华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 杜寒宇 |
地址: | 528244 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 鳖甲 龟甲 检测 特征 多肽 组合 筛选 方法 应用 | ||
1.一种用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:
分别制备中华鳖鳖甲药材供试品溶液、乌龟龟甲药材供试品溶液、佛罗里达鳖鳖甲供试品溶液、角鳖鳖甲供试品溶液、中华鳖鳖甲标准汤剂供试品溶液、中华鳖醋鳖甲标准汤剂供试品溶液和乌龟醋龟甲标准汤剂供试品溶液;
对所述中华鳖鳖甲药材供试品溶液、乌龟龟甲药材供试品溶液、佛罗里达鳖鳖甲供试品溶液、角鳖鳖甲供试品溶液、中华鳖鳖甲标准汤剂供试品溶液、中华鳖醋鳖甲标准汤剂供试品溶液和乌龟醋龟甲标准汤剂供试品溶液进行超高效液相色谱联用质谱测定;
将所得数据导入Proteome Discoverer分析软件,采用Uniprot的数据库Testudines进行搜库匹配,采用SEQUEST检索算法,筛选获得用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合。
2.根据权利要求1所述的用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法,其特征在于,所述超高效液相色谱联用质谱的色谱条件包括:以乙腈为流动相A,以体积分数为0.05%~0.2%的甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱,所述梯度洗脱包括如下程序:
0min~9min,所述流动相A的体积分数由8%上升到11%,所述流动相B的体积分数由92%下降到89%;
9min~11min,保持所述流动相A的体积分数为11%,所述流动相B的体积分数为89%;
11min~17min,所述流动相A的体积分数由11%上升到21%,所述流动相B的体积分数由89%下降到79%;
17min~21min,所述流动相A的体积分数由21%上升到35%,流动相B的体积分数由79%下降到65%。
3.根据权利要求2所述的用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法,其特征在于,所述超高效液相色谱联用质谱的色谱条件还包括:柱温为35℃±10℃,流速为0.35mL/min±0.10mL/min。
4.根据权利要求2所述的用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法,其特征在于,所述超高效液相色谱联用质谱的质谱条件包括:质量分析器为四极杆-静电场轨道阱;电喷雾正离子模式,进行多反应监测。
5.根据权利要求4所述的用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法,其特征在于,所述超高效液相色谱联用质谱的质谱条件还包括:鞘气流速为10Arb±2Arb;辅助气流速为10Arb±2Arb;喷雾电压为3.80kV±0.2kV;毛细管温度为320℃±10℃;辅助气温度为320℃±10℃;碰撞能量为30%±5%。
6.根据权利要求1-5任一项所述的用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法,其特征在于,所述中华鳖鳖甲药材供试品溶液、乌龟龟甲药材供试品溶液、佛罗里达鳖鳖甲供试品溶液、角鳖鳖甲供试品溶液、中华鳖鳖甲标准汤剂供试品溶液、中华鳖醋鳖甲标准汤剂供试品溶液和乌龟醋龟甲标准汤剂供试品溶液的制备步骤分别为:
混合溶剂和中华鳖鳖甲药材,加热回流后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备中华鳖鳖甲药材供试品溶液;
混合溶剂和乌龟龟甲药材,加热回流后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备乌龟龟甲药材供试品溶液;
混合溶剂和佛罗里达鳖鳖甲,加热回流后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备佛罗里达鳖鳖甲供试品溶液;
混合溶剂和角鳖鳖甲,加热回流后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备角鳖鳖甲供试品溶液;
混合溶剂和中华鳖鳖甲标准汤剂,超声后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备中华鳖鳖甲标准汤剂供试品溶液;
混合溶剂和中华鳖醋鳖甲标准汤剂,超声后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备中华鳖醋鳖甲标准汤剂供试品溶液;
混合溶剂和乌龟醋龟甲标准汤剂,超声后,加入胰蛋白酶溶液酶解,制备乌龟醋龟甲标准汤剂供试品溶液。
7.一种鳖甲和龟甲的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
制备待测样品溶液;
对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱联用质谱测定,将测定结果与权利要求1所述的筛选方法获得的用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合进行对比。
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