[发明专利]环肽抗生素缬氨霉素高产菌株及其应用

权利要求书

1.一株环肽抗生素缬氨霉素高产菌株——链霉菌 IFE-v1m38（Streptomyces sp.IFE-v1m38），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No. 20046，保藏日期：2020年06月08日。

2.权利要求1所述链霉菌IFE-v1m38在微生物发酵制备油菜菌核病菌抗菌剂中的应用。

3.权利要求1所述链霉菌IFE-v1m38在微生物发酵制备缬氨霉素（Valinomycin）中的应用，所述缬氨霉素结构如下式所示：

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4.一种利用权利要求1所述链霉菌IFE-v1m38微生物发酵制备缬氨霉素的方法，其特征在于所述方法包括：将链霉菌 IFE-v1m38（Streptomyces sp. IFE-v1m38）接种至发酵培养基，在温度26~30 ℃、转速 150~500 rpm、通气量0~4.0 vvm条件下，氨水调控pH 7.0~7.4，进行发酵培养48~192 h，获得含有缬氨霉素的发酵液、经分离纯化获得所述缬氨霉素。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述发酵培养基组成如下：黄豆饼粉 5~30.0g/L，可溶性淀粉 5~20.0 g/L，葡萄糖 5~30 g/L，胰蛋白胨1~10.0 g/L，酵母提取物1~10.0g/L，牛肉浸膏 0.5~5.00 g/L，NaCl 0.1~5.0 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~1.5 g/L，K₂HPO₄·3H₂O0.1~1.5 g/L，CaCO₃ 0.5~5.0 g/L，FeSO₄·7H₂O 0.001~0.02 g/L，0.1~3.0 ‰消泡剂，121℃灭菌10~20min。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述链霉菌 IFE-v1m38（Streptomyces sp.IFE-v1m38）先接种至种子培养基进行培养获得种子液，种子液再接种至发酵培养基进行发酵培养，所述种子培养基组成如下：酵母提取物5~20.0 g/L，牛肉膏 1~15.0 g/L， NaCl0.1~2.0 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~2.0 g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.1~2.0 g/L， FeSO₄·7H₂O 0.001~0.02 g/L

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述分离纯化方法如下：含有缬氨霉素的发酵液加1~3‰ 絮凝剂聚氯化铝，真空泵抽滤固液分离，得到菌丝体用纯甲醇反复浸泡抽提3~5次，抽提物浓缩后，再用乙酸乙酯反复萃取2~4次、饱和NaCl溶液水洗1~3次、分液漏斗静置分层，真空旋转蒸发仪浓缩有机相，样品用真空干燥仪除水；采用200~300目的硅胶柱层析，样品的上样量与硅胶用量比例为1.0 ：30~60，用0~100 %的MeOH-CHCl₃梯度洗脱，选择有活性的组分通过制备TLC进一步分离纯化，展开剂为MeOH：CHCl₃=20:80；再采用Shimadzu LC-20AP制备液相分离纯化收集的活性物质，柱层析，以甲醇：1 ‰ 三氟乙酸水溶液= 90:10为流动相，柱温25℃，检测波长210 nm，流速为2.0 mL/min；收集的活性组分在真空旋转蒸发仪浓缩和冷冻干燥后得到白色固体，即为所述缬氨霉素。