[发明专利]发酵方法

权利要求书

1.一种用于生产二羧酸的方法，所述方法包括在包含合适发酵培养基的容器中发酵真菌细胞，其中在维生素和/或微量元素的存在下重复利用至少部分所述真菌细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述重复利用包括：从所述容器中取出真菌细胞和将所述细胞添加回相同容器或添加至包含合适发酵培养基的第二容器。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述维生素是B复合维生素。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述维生素是B₁、B₂、B₃、B₅、B₆、B₇、B₈、B₉、B₁₂或B_x维生素。

5.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中所述微量元素是铁、钴、铜、锌、锰、钼、碘、硒、硼、铬、砷或硅。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述重复利用在锌、锰、钴、铜、钼、铁或硼的存在下进行。

7.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中所述真菌细胞是酵母，例如属于Saccharomyces cerevisiae的酵母。

8.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中所述真菌细胞是经遗传修饰的真菌细胞，其包含选自以下的基因的遗传修饰：编码丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、苹果酸脱氢酶、富马酸酶、富马酸还原酶、异柠檬酸裂合酶、苹果酸合酶和二羧酸转运体的基因。

9.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中所述二羧酸是琥珀酸、富马酸、苹果酸或己二酸。

10.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中从所述发酵培养基中回收二羧酸。

11.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中进行多个再循环步骤，例如2个或3个再循环步骤。