[发明专利]稀有鮈鲫载脂蛋白ApoE基因、重组蛋白、多克隆抗体及制备方法和应用

说明书

本发明是从分子水平研究生物大分子的结构和功能，属于基因工程领域、蛋白质‑核酸体系，涉及稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）载脂蛋白ApoE基因的核苷酸序列、经过密码子优化后的核苷酸序列、以及所编码的氨基酸序列，尤其涉及一种稀有鮈鲫ApoE重组蛋白的表达制备方法和蛋白抗兔多克隆抗体的制备。通过重组表达稀有鮈鲫ApoE可以进一步在体外研究分析该蛋白的结构和功能，另外多克隆抗体的制备能够为进一步检测鱼体内ApoE的含量奠定基础。

技术领域

本发明是从分子水平研究生物大分子的结构和功能，属于基因工程领域、蛋白质-核酸体系，涉及稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）载脂蛋白ApoE基因的核苷酸序列、经过密码子优化后的核苷酸序列、以及所编码的氨基酸序列，尤其涉及一种稀有鮈鲫ApoE重组蛋白的表达制备方法和蛋白抗兔多克隆抗体的制备。

背景技术

ApoE是一种多态性蛋白，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能，ApoE主要存在于CM、VLDL、IDL和部分HDL中，ApoE存在于所有研究过的不同种属动物中。在动物和人体中进行的关量营养和生化研究表明,ApoE在肝脏和肝外组织的脂蛋白分解代谢中起着重要的作用。ApoE 除了可引起脂质代谢异常，还参与致血管内皮细胞功能失调过程，有促炎和促发动脉粥样硬化的作用;ApoE能引起血管内皮细胞和单核细胞活化，启动相关信号通路而导致细胞粘附率增加稀有鮈鲫，属鲤科，鮈鲫属，本属仅有1种，为我国特有种，野生数量不多，仅见于长江上游的大渡河支流和四川成都附近的平原及其西部边缘地区的小河流中。稀有鮈鲫具有体型小、繁殖周期短、性成熟快、产卵批次多、胚胎发育可人为控制、对化学物质敏感等优良特点，再加上它具有单型种、温度适应范围广、饲养管理方便、卵膜透明等一系列作为实验鱼的优点，是我国迄今发现的最适合作为实验动物的鱼类。鱼类是理想的心血管疾病研究模型，对ApoE的研究，有助于了解机体内胆固醇的转运过程。动物摄取高胆固醇膳食后，血浆ApoE的浓度显著增加,血中出现富含胆固醇的两种脂蛋白, 即β-VLDL和HDLc, 两者均含较多的ApoE。但是目前关于ApoE的抗体主要集中于哺乳动物上，没有针对鱼类上可供应用的抗体。通过原核表达方法获得的重组蛋白，大多是以包涵体形式存在的，不具有生物学活性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了稀有鮈鲫载脂蛋白ApoE基因、重组蛋白、多克隆抗体及制备方法和应用，以解决缺少鱼类ApoE检测抗体而无法进行ApoE蛋白测定等问题。

本发明的技术方案如下：

一种稀有鮈鲫载脂蛋白ApoE基因，所述ApoE基因命名为GrApoE，其核苷酸序列如SEDID NO：1所示。

一种密码子优化后的稀有鮈鲫载脂蛋白ApoE基因，其核苷酸序列如SED ID NO：2所示。

一种稀有鮈鲫载脂蛋白ApoE重组蛋白，其氨基酸序列如SED ID NO：3所示。

上述稀有鮈鲫载脂蛋白ApoE重组蛋白的制备方法，包括：

构建重组质粒：将稀有鮈鲫ApoE密码子优化基因序列SED ID NO：2连入pET30a表达载体得到pET30a- GrApoE重组质粒；

重组蛋白的诱导表达：将pET30a- GrApoE重组质粒转化入大肠杆菌中，培养，诱导，裂解，纯化，得到稀有鮈鲫ApoE重组蛋白。