[发明专利]一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法

说明书

本发明属于检测领域，具体涉及一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法。该鉴定方法具体通过以下步骤实现：（1）标准溶液配置：吸取驴源多肽A1、驴源多肽A2标准储备液，碳酸氢铵溶液稀释至刻度，配制混合标准工作溶液；吸取驴源多肽A1同位素、驴源多肽A2同位素标准储备液，碳酸氢铵溶液稀释至刻度，配制成混合内标工作溶液；（2）标准曲线制备；（3）试样处理后采用液相色谱‑质谱法进行检测。本发明提供的鉴定方法，鉴定结果准确，且操作简单，大大降低了检测成本；本发明提供的方法重复性好，且稳定性好，能够更加全面的监控阿胶及其制剂的质量。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法。

背景技术

阿胶是一种固体胶，通过对马科动物驴的鲜皮或者干燥皮进行煎煮、浓缩而制成。阿胶能够调节人体机能、提高人体免疫力，同时在肿瘤、哮喘等疾病的防治过程中有着辅助性治疗作用。利用阿胶作为原料，采用现代技术衍生出许多阿胶产品：阿胶浆、复方阿胶浆、阿胶口服液等，阿胶浆等对于气血不足的疾病症状能有很好的治疗和保健功效，同时还具有美容养颜的功效。但是，由于驴养殖业发展滞后，且驴的生长周期慢，导致驴的存栏数日渐下滑，使得市场上驴皮作为主要原料出现短缺，且加个飞快上涨，甚至出现掺假掺杂等现象，严重扰乱市场。

中国专利申请CN109576379A公开了一种鉴定阿胶中驴源性成分的特异性引物及试剂盒，其通过DNA提取，PCR特异性扩增等来鉴别原料中是否存在驴源性成分，该类方法试验过程繁琐，检测成本高，且需要特定的设备进行检测。中国专利CN105842375A公开了一种鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽，该方法指出了35条特异性多肽，该方法可能出现漏检，准确性有待提高。因此，研究一种更加高效、准确率高的驴源性成分的鉴定方法成为了亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法， 具体包括以下步骤：

（1）标准溶液配置：准确称取驴源多肽A1、驴源多肽A2对照品各10 mg，分别置于10mL容量瓶，用1%碳酸氢铵溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL 的驴源多肽A1、驴源多肽A2标准储备液；准确称取驴源多肽A1、驴源多肽A2同位素内标各10 mg，分别置于10mL容量瓶，用1%碳酸氢铵溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL 的驴源多肽A1同位素、驴源多肽A2同位素标准储备液，-18℃保存；分别准确吸取驴源多肽A1、驴源多肽A2标准储备液各200 μL于10mL容量瓶，1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，配制成浓度为20 μg/mL混合标准工作溶液；分别准确吸取驴源多肽A1同位素、驴源多肽A2同位素标准储备液各100 μL于10 mL容量瓶，1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL混合内标工作溶液；

（2）标准曲线制备：分别准确移取混合标准工作溶液，分别加入混合内标工作溶液，用1%碳酸氢铵溶液稀释，配制成浓度为20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500ng/mL的系列标准溶液，内标浓度均为200 ng/mL，供液相色谱-串联质谱测定；

（3）试样处理：称取粉碎混匀后的阿胶试样0.1g，置于50 mL离心管中，加1%碳酸氢铵溶液溶解并稀释至刻度；取混匀后的阿胶浆2.0 g，置于15 mL离心管中，加1%碳酸氢铵溶液溶解并稀释至10ml；称取粉碎混匀后的阿胶糕1.0g，置于50 mL离心管中，加1%碳酸氢铵溶液溶解并稀释至刻度。分别准确吸取1.00 mL于15 mL离心管中，加胰蛋白酶溶液1.0 mL，再加入混合内标工作溶液100 μL，用1%碳酸氢铵溶液稀释至5 mL，摇匀，置于恒温箱中，于37℃恒温酶解16小时，取出，冷却至室温，经0.22 μm滤膜过滤，采用液相色谱-质谱法进行检测。