[发明专利]粘蛋白和循环肿瘤细胞的均相可视化/荧光POCT检测方法

权利要求书

1.一种粘蛋白均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

在MOPS缓冲液中加入HP-DNA，AgNO₃或者Hg(NO₃)₂/HgCl₂溶液，室温下避光反应，形成具有C-Ag⁺-C结构或者T-Hg²⁺-T结构的A液；

直接向A液中加入不同浓度的粘蛋白，室温下反应后，加入发光CdTe QDs或者CdSeQDs，反应后测定荧光值；

或者在MOPS缓冲液中加入P1-DNA和核酸适配体，室温下反应，形成双链DNA后，在加入不同浓度的粘蛋白，完成竞争反应，释放游离P1-DNA链，形成B液，将B液加入A液，再加入Helper-DNA，室温反应，最后加入发光CdTe QDs或者CdSe QDs，反应后测定荧光值。

2.根据权利要求1所述的粘蛋白均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于：当直接向A液中加入不同浓度的粘蛋白时，荧光信号强度变化与0.25-10ng/mL浓度范围内的粘蛋白呈现线性关系，其线性方程为Y＝-633C+9664，线性相关性系数R²＝0.990。

3.根据权利要求1所述的粘蛋白均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于：当将B液加入A液时，粘蛋白在1fg/mL-1pg/mL浓度范围内，紫外灯照射下，肉眼可区分fg/mL级别的粘蛋白，颜色由红色逐渐变浅，然后逐渐变为蓝色。

4.根据权利要求1所述的粘蛋白均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于：当将B液加入A液时，粘蛋白在1fg/mL-1pg/mL浓度范围内，荧光信号降低与粘蛋白浓度的对数呈现线性关系，其线性方程为Y＝-922LogC-8329，线性相关性系数R²＝0.976。

5.一种循环肿瘤细胞的均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

缓冲液中加入HP-DNA和AgNO₃/Hg²⁺溶液，室温下避光反应，形成具有C-Ag⁺-C结构或者T-Hg²⁺-T结构的A液；

缓冲液中加入P1-DNA和核酸适配体，室温下反应一段时间，加入不同浓度的循环肿瘤细胞，继续反应，释放游离P1-DNA，形成B液：

将B液加入A液，再加入Helper-DNA，室温反应；

最后加入发光CdTe QDs或者CdSe QDs，反应后测定荧光值。

6.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞的均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于，荧光信号的降低与100-10⁵cells/mL范围内循环肿瘤细胞浓度的对数呈线性关系，其线性方程为Y＝-1029LogN+7771，线性相关系数R²为0.994。

7.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞的均相可视化/荧光POCT检测方法，其特征在于，所述HP-DNA包括HP1-DNA和HP2-DNA；

在含有AgNO₃/Hg²⁺的缓冲溶液中分别加入HP1-DNA和HP2-DNA，形成两种C-Ag⁺-C结构或者T-Hg²⁺-T结构，室温下避光反应后混合，形成A液；

在缓冲液中加入P1-DNA、P2-DNA和核酸适配体，室温下反应形成适配体-P1-P2双链DNA，加入待测不同浓度的循环肿瘤细胞反应，释放出游离P1链和P2链，形成B液；

将B液加入A液，再加入Helper-DNA1和Helper-DNA2，室温反应；

最后加入发光CdTe QDs或者CdSe QDs，反应后测定荧光值。