[发明专利]一种医用hUC-MSCs-MVs批量制备流程及质控

说明书

本发明公开了一种医用hUC‑MSCs‑MVs批量制备流程及质控，包括HUC‑MSCs‑MVs原料及质控、HUC‑MSCs‑MVs制备（流程）及质控、HUC‑MSCs‑MVs存储和运输及质控和一套完整的批量制备及质控流程；本发明能够快速有效的医用批量培养制备hUC‑MSCs‑MVs，且制备效果好，且能够更精准的对hUC‑MSCs‑MVs进行质量把控检测，实用性高，制备流程完善，便于运用批量生产。

技术领域

本发明涉及医用培养技术领域，具体是一种医用hUC-MSCs-MVs批量制备流程及质控。

背景技术

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

现有培养技术培养制备效率低，质控把关较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种医用hUC-MSCs-MVs批量制备流程及质控，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种医用hUC-MSCs-MVs批量制备流程及质控，包括HUC-MSCS-MVS原料及质控、HUC-MSCS-MVS制备流程及质控和HUC-MSCS-MVS存储和运输及质控，所述HUC-MSCS-MVS原料及质控步骤为：

1.自愿捐赠，以自愿的原则，按照国家伦理委员会相关规定，遵守相关法律的前提下，在捐赠者知情同意的情况下，自愿捐赠脐带。

2.产前母体检查，梅毒螺旋体、艾滋病病毒(HIV)、巨细胞病毒(CMV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等病原体检测;

3.产前母胎儿检查，排除胎儿及胎盘疾病，如：胎儿无先天畸形，无遗传病等；

4.脐带细胞排查，对脐带来源的干细胞进行基因验证测序，排除重大疾病因素；检验干细胞活性；检测细胞有核细胞比例；细菌、霉菌、衣原体等培养阴性等；

5.备用，完善上述检测后，入库冻存备用；

所述HUC-MSCS-MVS制备流程及质控步骤为：

S1、医院捐赠脐带来源，脐带来源进行上述质控检测合格后，在液氮中冻存备用。

S2、将S1步骤中干细胞复苏增殖至80%以上汇合时，进行细胞传代，步骤如下：提前将所需PBS、培养基、胰蛋白酶复温；在超净台中，弃去培养瓶中的细胞上清液，加入5mlPBS，轻轻摇晃，后倒掉，重复3遍。每孔加入1ml0.25%胰蛋白酶，轻轻摇晃使胰酶充分淹没底部细胞，立即放入37℃恒温箱消化3min。3min后取出培养瓶，于光学显微镜下观察细胞是否变圆浮起，可轻轻震荡培养瓶，使大部分细胞在镜下呈漂浮游动状态。迅速于超净台中加入5ml完全培养基终止消化，并将转移至15ml离心管，用PBS冲洗1次瓶内剩余细胞，一同转入离心管中，800rpm离心5min。弃上清，用6ml培养基重悬，轻轻吹打混匀细胞，向已提前加入8ml培养基的3个新培养瓶中各加入2ml细胞混悬液，轻轻摇晃使细胞分布均匀，于光学显微镜下观察确认后，放入37℃/CO2培养箱中培养。