[发明专利]一种体外建立肿瘤类器官的方法

说明书

本发明公开了一种体外建立肿瘤类器官的方法，所述方法包括：在EMT抑制剂存在的情况下，体外培养肿瘤细胞，从而形成肿瘤类器官。本发明的方法，方便快捷，能在短时间内高效地达到抑制类器官中EMT发生的目的，并且确实能够有效地阻止类器官对FO药物组合产生的耐药性，能够用于预测病人对一线化疗药物组合FO敏感与否，解决基于Matrigel的类器官不能预测FO组合药物的敏感性的缺陷。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种体外建立肿瘤类器官的方法，解决类器官对5-氟脲嘧啶和奥沙利铂等化疗药产生耐药的问题。

背景技术

如今，肿瘤的发病率越来越高，临床上虽然有用药指南，患者用药反应性由于肿瘤的异质性存在，而有所不同。肿瘤类器官(patients derived organoids,PDO)是肿瘤组织在体外经过3D培养获得的立体样细胞团。从肿瘤病人样本出发，构建出患者特异性的肿瘤类器官，用于新药筛选和药物敏感性研究，在理论和实践中都具有可行性。较于传统方法培养的细胞以及哺乳动物的荷瘤模型，类器官更贴近人体生物学特征，并且可以实时观察，因此，该项技术在肿瘤患者的用药指导方面具有突破性进展。临床方面和研究领域将该技术广泛用于临床前药物筛选和临床药敏筛选，为肿瘤患者临床用药提供选择依据，从而制定个体化治疗策略，为临床肿瘤患者争取最佳治疗机会和更多治疗时间。

Matrigel是一种商品化的基质胶，是得到广泛认可和应用的培养类器官的细胞外基质成分。FO化疗方案(5-氟尿嘧啶加奥沙利铂)是结直肠癌患者的一线化疗方案。有研究表明，基于Matrigel的结直肠癌肿瘤类器官在对一线化疗药物组合FO的敏感性进行预测的过程中，由于产生获得性耐药性，无法准确预测癌症病人临床上对于FO的敏感性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方法，解决基于Matrigel的结直肠癌肿瘤类器官在对一线化疗药物组合FO的敏感性进行预测的过程中，由于产生获得性耐药性，而无法预测癌症病人临床上对于FO敏感性的问题。

本发明的第一方面，提供一种体外建立肿瘤类器官的方法，所述方法包括：在EMT抑制剂存在的情况下，体外培养肿瘤细胞，从而形成肿瘤类器官。

在另一优选例中，所述方法包括以下步骤：

(a)将分离的肿瘤组织和/或原代肿瘤类器官消化为肿瘤单细胞，并传代培养，获得传代类器官培养物；

(b)在第2、3和/或4天，向所述传代类器官培养物添加EMT抑制剂，继续培养，从而获得所述肿瘤类器官。

在另一优选例中，在步骤(b)中，在EMT抑制剂存在下，培养15-30小时。

在另一优选例中，将原代肿瘤类器官消化为肿瘤单细胞，传代培养，获得传代类器官培养物。

在另一优选例中，将分离的肿瘤组织消化为肿瘤单细胞，经5-7天的体外3D培养，得到原代肿瘤类器官；并将原代肿瘤类器官传代培养消化为肿瘤单细胞，获得传代类器官培养物。

在另一优选例中，将原代肿瘤类器官消化为肿瘤单细胞，传代培养，在第3天，添加EMT抑制剂继续培养，较佳地继续培养24小时。

在另一优选例中，所述EMT抑制剂为盐酸甲烯土霉素或(E)-SIS3。

在另一优选例中，所述EMT抑制剂在培养体系中的浓度为5-20μM，较佳为10μM。

在另一优选例中，所述盐酸甲烯土霉素在培养体系中的浓度为5-20μM，较佳为10μM。

在另一优选例中，所述(E)-SIS3在培养体系中的浓度为1-5μM，较佳为3μM。

在另一优选例中，所述肿瘤类器官为结肠癌肿瘤类器官或直肠癌肿瘤类器官。