[发明专利]一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法

说明书

本发明公开了一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，属于生物细胞基因工程技术领域，包括以下步骤：细胞培养基、细胞单克隆筛选、单克隆细胞染色体荧光原位杂交、分析提升CHO生产细胞株的性能的因素。本发明清楚地观察到CHO细胞株性能可以达到更高的细胞密度，细胞密度、细胞生存率及表达蛋白均有所提升，这说明本发明培养基是一个稳定平衡的整体，各成分相互作用，共同促进中国仓鼠卵巢细胞的生长，为CHO细胞株细胞生长提供了丰富的营养环境，避免了有血清添加的各种弊端，本发明培养基各组分共同作用，减少了中国仓鼠卵巢细胞生长代谢产生的有害代谢物，本发明培养基可以促进中国仓鼠卵巢细胞功能蛋白的表达和性能提升。

技术领域

本发明涉及一种CHO细胞株，涉及生物细胞基因工程技术领域，特别是涉及一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法。

背景技术

随着基因组学，分子生物学以及现代医学的不断发展，生物医药产业也逐步展现出其特有的优势并在近十年来在国内取得了快速的发展，其中重组蛋白药物，特别是抗体类药物发展最为迅速，国内已经有一大批企业以及研究机构从事抗肿瘤，心血管，免疫疾病方向的抗体开发研究工作，多个抗体药物已经上市。

中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary cell,CHO）是表达药用生物活性大分子的首选，CHO很少分泌自身的内源蛋白，有利于蛋白的纯化。分泌表达是CHO的主要表达途径，但许多蛋白质（细胞因子等）的表达相对较低，增加细胞分泌的能力能显著促进重组蛋白的表达。

在CHO细胞表达分泌性蛋白质过程中，起初会合成由15-30个疏水性氨基酸组成的信号肽，信号肽随后被细胞质中的信号识别颗粒（Signal-Recognition Particle,SRP）所识别，识别后导致蛋白质合成暂停，随后核糖体与内质网膜结合，信号肽依靠其疏水性插入内质网膜腔内，在核糖体结合内质网膜后SRP将会离开，处于暂停状态的蛋白质合成重新开始。而后信号肽酶对信号肽进行切割。一个合适的信号肽有助于提高重组蛋白的表达水平。但是，信号肽和外源蛋白N端相连会发生切割位点的偏移，发生切割目的蛋白氨基酸的可能。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，以解决上述背景技术中的问题。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，包括以下步骤：

步骤1、配制细胞培养基；

步骤2、细胞单克隆筛选；

步骤3、单克隆细胞染色体荧光原位杂交；

步骤4、分析提升CHO生产细胞株的性能的因素。

优选的，所述步骤1中细胞培养基的配制过程为：

A1、首先悬浮培养中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系，以CHO—K1细胞系为基础培养基；

A2、在培养基中添加谷氨酰胺及抗结团剂、氨基酸、可溶性维生素、无机盐、白蛋白以及转铁蛋白，加入适量的注射用水至总体积的75％-80％，轻微缓慢搅拌溶解；

A3、并继续加入维生素E和维生素D，并加入0.22％的聚山梨酯，搅拌溶解，得到配制的基础培养基溶液A液。

优选的，所述向步骤A3所得A液中加入碳酸氢钠，轻微缓慢搅拌溶解，加入适量的注射用水，搅拌配制得B液，在所得B液中用0.9-1.2mol/L氢氧化钠溶液或0.9-1.2mol/L盐酸溶液调pH至7.1-7.3，配制得C液，所得C液中用0.22μm滤膜正压过滤除菌，即得细胞培养基。