[发明专利]一种基于黑猩猩腺病毒表达spike蛋白的新型冠状病毒疫苗

说明书

本发明公开了一种基于黑猩猩腺病毒表达spike蛋白的新型冠状病毒疫苗。本发明提供了一种重组腺病毒，是将含有SARS‑CoV‑2的Spike蛋白的编码基因的DNA分子插入黑猩猩型腺病毒AdC6的基因组DNA得到的，表达SARS‑CoV‑2的Spike蛋白的重组腺病毒。本发明的重组腺病毒AdC6‑CoV19中，黑猩猩型腺病毒AdC6作为载体表达SARS‑CoV‑2的spike蛋白。本发明的重组腺病毒AdC6‑CoV19作为疫苗，可以引起特异性免疫反应。本发明对于COVID‑19的防控具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于黑猩猩腺病毒表达spike蛋白的新型冠状病毒疫苗。

背景技术

腺病毒由于转导效率高、可携带外源基因，易于扩增及纯化，能够激起针对外源基因有效的T细胞免疫反应，被视为优良的疫苗载体，广泛应用于各种传染病疫苗的研究，包括HIV、流感、埃博拉、疟疾、狂犬病等。其中最常见的是人血清5型腺病毒AdHu5。然而，由于75-80％的个体中存在抗AdHu5的预存中和抗体，以AdHu5为载体的疫苗，其免疫效果受预存中和抗体的影响，不仅削弱其免疫效果，而且可能增强副反应。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于黑猩猩腺病毒表达spike蛋白的新型冠状病毒疫苗。

本发明提供了一种重组腺病毒，是将含有SARS-CoV-2的Spike蛋白的编码基因的DNA分子插入黑猩猩型腺病毒AdC6的基因组DNA得到的，表达SARS-CoV-2的Spike 蛋白的重组腺病毒。所述插入为广义插入，既可以为插入两个相邻核苷酸之间，也可以为插入不相邻核苷酸之间(即替换部分核苷酸)。含有SARS-CoV-2的Spike蛋白的编码基因的DNA分子具体可为用于表达SARS-CoV-2的Spike蛋白的表达框。

本发明还保护一种重组腺病毒，其基因组DNA自上游至下游依次包括如下三个区段：序列表的序列3中第1-589位核苷酸所示的DNA区段、特定表达框、序列表的序列 3中第721-30394位核苷酸所示的DNA区段；所述特定表达框为用于表达SARS-CoV-2 的Spike蛋白的表达框。具体来说，所述重组腺病毒的基因组DNA由所述三个区段组成。

本发明还保护一种重组腺病毒，其制备方法包括如下步骤：

(1)以AdC6-ΔE1-ΔE3-E4(orf6Hu5)为出发载体，插入特定表达框，得到重组腺病毒质粒；所述特定表达框为用于表达SARS-CoV-2的Spike蛋白的表达框；

(2)将所述重组腺病毒质粒转染腺病毒包装细胞，然后进行细胞培养，得到重组腺病毒。

所述插入为广义插入，既可以为插入两个相邻核苷酸之间，也可以为插入不相邻核苷酸之间(即替换部分核苷酸)。

所述特定位点为ΔE1区域中的任意位点或ΔE3区域中的任意位点。

所述重组腺病毒质粒具体可为：用所述特定表达框取代腺病毒质粒 pAdC6-ΔE1-ΔE3-E4(orf6Hu5)中的小区段(该小区段即序列表的序列3中第590-720 位核苷酸)，得到的重组腺病毒质粒pAdC6-CoV19。

本发明还保护一种产品，其活性成分为以上任一所述重组腺病毒；

所述产品的用途为如下(c1)或(c2)：

(c1)作为新型冠状病毒疫苗；

(c2)作为抗新型冠状病毒药物。

本发明还保护以上任一所述重组腺病毒的应用，为如下(d1)或(d2)或(d3) 或(d4)：

(d1)制备新型冠状病毒疫苗；

(d2)制备抗新型冠状病毒药物；

(d3)作为新型冠状病毒疫苗；