[发明专利]半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法及其用途在审
| 申请号： | 202010911812.7 | 申请日： | 2020-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN112005968A | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;操然 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | A01K67/027 | 分类号： | A01K67/027;C12N15/89 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 吴爽;徐冬涛 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 半乳糖 转移酶 galt 基因 突变 小鼠 模型 构建 方法 及其 用途 | ||
1.一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下主要步骤：
（1）靶点构建：寻找半乳糖基转移酶B4GalT基因的CDS区，明确外显子部分，确定基因突变位点；
（2）获取受精卵，并进行显微注射：通过体外转录的方式，获得cas9 mRNA和gRNA，通过合成获得oligo donor DNA，将cas9 mRNA、gRNA和oligo donor DNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠；
（3）将阳性F0代小鼠和C57BL/6J配繁后，得到具有B4GalT基因定点突变的阳性F1代杂合子；
（4）阳性杂合子小鼠交配后经PCR测序确认获得阳性纯合子，表明小鼠模型构建成功。
2.根据权利要求1所述的一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述突变位点为小鼠第4染色体的第4外显子B4GalT1基因中286位氨基酸。
3.根据权利要求1所述的一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述gRNA的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。
4.根据权利要求1所述的一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述oligo donor DNA的序列如SEQ ID NO:2所示。
5.根据权利要求1所述的一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述F0代小鼠的鉴定引物如SEQ ID NO:3所示。
6.权利要求1所述的一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法获得的小鼠模型在筛选糖基化相关疾病的药物中的应用。
7.权利要求1所述的一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法获得的小鼠模型在制备无乳糖乳产品中的应用。
8.获得半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的试剂盒。
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