[发明专利]一种CAR-T细胞的培养基及培养方法

说明书

本发明提供一种CAR‑T细胞的培养基及培养方法，包括以下重量份原料：肌酸磷酸32～60份、焦磷酸12～34份、白细胞介素12～50份、碱性成纤维细胞生长因子10～40份、苯乙酸胍15～35份、巯基乙酸11～38份、角鲨烷8～15份、转铁蛋白2～9份，经脐带血分离得到CAR‑T细胞进行体外培育，利用本发明的配制的培养基结合培养方法进行培育，得到的CAR‑T细胞个体差异小，增殖率高，达到90％以上，杀瘤活性高，抗瘤谱广，细胞毒活性显著增强，杀瘤活性达到75％以上，提高临床疗效。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，特别涉及一种CAR-T细胞的培养基及培养方法。

背景技术

CAR-T细胞治疗最早的研究始于1989年，是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。在实验室，技术人员通过基因工程技术，将T细胞激活，并装上定位导航装置CAR(肿瘤嵌合抗原受体)，将T细胞这个普通“战士”改造成“超级战士”，即CAR-T细胞，他利用其“定位导航装置”CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，它们能高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。但是目前体外培育的CAR-T细胞增殖力不高、细胞毒活性较低的缺点。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种CAR-T细胞的培养基及培养方法，解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种CAR-T细胞的培养基：包括以下重量份原料：肌酸磷酸32～60份、焦磷酸12～34份、白细胞介素12～50份、碱性成纤维细胞生长因子10～40份、苯乙酸胍15～35份、巯基乙酸11～38份、角鲨烷8～15份、转铁蛋白2～9份。

优选地，一种CAR-T细胞的培养基，包括以下重量份原料：肌酸磷酸45份、焦磷酸22份、白细胞介素35份、碱性成纤维细胞生长因子25份、苯乙酸胍25份、巯基乙酸24份、角鲨烷10份、转铁蛋白5份。

优选地，调节碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10～25ng/mL。

进一步的，一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、收集脐带血，分离出CAR-T细胞，选取1～3mm3CAR-T细胞放置于离心管中，加入2～5mg/ml的胰酶EDTA浸润，然后加入DMEM完全培养基终止胰酶消化；

S2、将D-Hank’s平衡盐溶液加入S1中的离心管中，将离心管内的溶液离心4～8min，离心力为300～800g，离心速率为1500～2200r/min；

S3、将离心后的CAR-T细胞转移至上述培养基中，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激培养，放至培养箱中培养8～12天。

优选地，所述DMEM的添加量为2～5ml。

优选地，所述培养箱的培养条件为，培养温度28～40℃，磁场频率为2～50Hz，磁场强度3～100mT。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的CAR-T细胞的合理选择培养基质，科学配比，各基质协同发挥作用，共同提供CAR-T细胞营养基质，提高增殖能力，调节培养方法，限定培养环境，优化培养体系而获得的细胞增殖能力更强、杀伤活力更大的肿瘤杀伤细胞群体，使得培养出的CAR-T细胞个体差异小，增殖率高，达到90％以上，杀瘤活性高，抗瘤谱广，细胞毒活性显著增强，杀瘤活性达到75％以上，提高临床疗效。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。