[发明专利]一种含有脂肪干细胞的皮肤损伤修复剂及制备方法

说明书

本发明涉及一种含有脂肪干细胞的皮肤损伤修复剂及制备方法。本发明制备的转基因miR34a脂肪干细胞，其中所述miR的高表达能够促进脂肪干细胞向皮肤细胞的分化。将所述的转基因miR34a脂肪干细胞制备成为皮肤损伤修复剂之后，通过验证证明了其具有较显著的促进伤口愈合效果，因此可用于消炎，皮肤再生或伤口愈合。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体的涉及一种含有脂肪干细胞的皮肤损伤修复剂及制备方法。

背景技术

生物体的组织、器官中存在一定数量的干细胞。以维持其再生或者参与损伤后的组织修复干细胞是一类具有多向分化潜能和自我更新特点的增殖速度缓慢的原始细胞，可以广泛运用于医学发展的各个领域，皮肤损伤的治疗、组织再生及年轻化就是其中的一个部分。严重烧伤患者常应用同种异体皮肤移植。然而这种移植一般仅能起到暂时覆盖创面的作用近30年。许多患者得益于通过细胞培养而得到的细胞治疗产品通过自体表皮角质细胞的培养。大量严重烧伤患者得到了有效治疗。

已有的研究证实，多能干细胞可分化为表皮细胞和真皮细胞。多种组织工程皮肤产品已获得美国FDA批准，Green等通过体外培养患者的角质细胞并将这些细胞产品应用于大面积烧伤患者，可以预防感染和脱水。另外，利用同种异体细胞进行临时表皮细胞替代的治疗方法还可以运用于其他皮肤疾病的治疗。特别是某些皮肤溃疡性疾病和某些遗传性皮肤病伤口治愈可能并不需要移植组织的永久保存。事实上，无论是生物性的无细胞基层。或者甚至是包含有纤维、胶原蛋白和透明质酸等生物性物质的基层等。在对其进行自体移植的时候。都会和同种异体的角质细胞移植时出现相同的情况。及逐渐排斥除了对创面的临时覆盖作用。还可以刺激细胞的内生性增殖和创面周围正常组织中的干细胞向创面聚集。

目前。皮肤再生医学方面还包括基因治疗相关内容。如以Ⅶ型胶原基因转染治疗恶性营养障碍性表皮水疱症等创伤愈合过程中，生长因子调控着损伤后皮肤再生的全过程，包括细胞趋化、增殖、基质合成与降解、炎症反应等多个方面。因此，在以往的临床实践中，常采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和角朊细胞生长因子(KGF)等促有丝分裂的生长因子以加速创面愈合和改善创面修复。然而，上述生长因子的外用效果十分有限，可能与生长因子的半衰期短暂、活性作用和生物利用度较低或需要携带其他(蛋白)分子等因素有关。基因治疗的优点是可以克服生长因子外用的种种不足能够通过局部活细胞主动和长期的表达来实现。目前，角朊细胞进行基因转染的技术较为成熟，但随着角朊细胞的不断分化，移植物在活体最终以“痂皮”的形式脱落。因此，除干细胞外，将基因导入其他成体细胞尚无法取得良好的治疗效果。

随着组织工程技术研究的深入,应用组织工程皮肤修复皮肤缺损是目前皮肤缺损修复研究的热点之一,脂肪组织来源干细胞(adipose tissue2derived stem cells,ADSC),由于来源广泛,取材方便,具有多向分化潜能[,在皮肤的创面微环境下有向血管内皮细胞和表皮细胞分化的可能,是皮肤组织工程种子细胞的理想来源。2001年，Zuk等第一次在脂肪组织中找到间充质干细胞，称为脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)，是一种具有多项分化潜能的干细胞，近年来成为干细胞中的“明星”细胞，成为各种损伤修复研究的重点。

目前，虽然已经有研究将脂肪干细胞用于皮肤损伤的治疗，但是其使用时干细胞转化为皮肤细胞的效率还不高，活性还不好，还有待于进一步的提高。

发明内容

本发明克服了现有技术的缺陷，提供了一种能够将来源广泛的脂肪干细胞高效的转化为皮肤细胞的方法。

发明人在研究脂肪干细胞分化皮肤的过程中，发现了miR-126和miR34a在脂肪干细胞向皮肤细胞分化时是高表达的存在，初步推定该所述miR的高表达能够促进脂肪干细胞向皮肤细胞的分化，并且在对分化的细胞进行蛋白鉴定时发现二个miR均能够上调RUNX2蛋白的表达，而RUNX2蛋白本身也是促进脂肪干细胞向表皮分化的重要蛋白，因此，初步鉴定miR-126和miR34a通过一系列的细胞调控来正向影响RUNX2的表达进而促进了脂肪干细胞向皮肤细胞的分化。