[发明专利]1型PAstV衣壳蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其制备

说明书

本发明公开了一株杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO:C2020107，分类命名Mus musculus B1F5。该杂交瘤细胞株分泌得到的抗1型PAstV衣壳蛋白单克隆抗体B1F5，经鉴定为IgG1，κ型，能特异性识别1型PAstV，其识别的抗原表位如SEQ.ID.NO.19所示。同时，还建立了相应杂交瘤细胞株的制备方法。据此，该抗体可作为鉴别诊断1型PAstV的特异性抗体，用于建立和制备1型猪星状病毒的ELISA、Western Blot、IFA等生物诊断方法及其试剂盒。研究表明，本发明杂交瘤抗体分泌水平稳定，特异性好，生物学特性优良，为1型PAstV免疫学检测方法研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于星状病毒技术领域，尤其涉及一种1型PAstV衣壳蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其制备。

背景技术

猪星状病毒(Porcine Astrovirus，PAstV)是一种单股、正链、无囊膜包被的RNA病毒。该病毒在1980年首次检测出来，发现PAstV与轮状病毒和杯状病毒混合感染的现象，并导致感染猪群出现腹泻、厌食等症状。PAstV在猪群中的流行十分普遍，流行病学调查发现，在加拿大、美国等地猪星状病毒的流行率分别高达79％和62％；在国内的流行病学调查发现，1型PAstV在广西猪群的流行率高达40.3％，其中猪场阳性率更是高达82.8％。已有研究表明，星状病毒可以通过粪-口途径进行传播，城市污水中也可以检测到星状病毒，其传播途径十分广泛。PAstV感染动物主要引起水样腹泻等临床症状，动物致病性试验发现，PAstV可以使感染猪出现轻微腹泻，增重减少等，受感染猪肠系膜淋巴结肿大，肠绒毛萎缩变短，肠道出现炎性反应等。

星状病毒的基因组大小约6.2-7.7kb，包含3个开放性阅读框(open readingframes,ORFs)，其中位于基因组5′端的ORF1a和ORF1b负责编码病毒转录和复制相关的非结构蛋白(non-structure protein，nsp)；而位于基因组3′端的ORF2通过转录形成亚基因组RNA而编码病毒唯一的结构蛋白，即衣壳蛋白(capsid protein，capsid)。cap蛋白大小约为80-90kDa，由病毒基因组ORF2位置转录的亚基因组RNA翻译得到病毒衣壳蛋白前体VP90，经细胞内半胱天冬酶和细胞外胰酶的一系列水解切割后，形成具有感染性的成熟病毒粒子，其中VP27和VP25主要由衣壳蛋白C端编码，组成病毒粒子纤突部分spike结构。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种1型PAstV衣壳蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其制备，为进一步建立1型PAstV的免疫学检测方法奠定了基础。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一株杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO:C2020107，分类命名Mus musculusB1F5。

上述杂交瘤细胞分泌的抗1型猪星状病毒衣壳蛋白的单克隆抗体B1F5。

单克隆抗体B1F5能与1型猪星状病毒衣壳蛋白抗原纤突结构域特异性结合。

单克隆抗体B1F5亚型为IgG1，κ型。

上述单克隆抗体B1F5在生物诊断鉴定中的应用。

生物诊断针对1型猪星状病毒,生物诊断包括ELISA、Western Blot、IFA。

猪星状病毒生物诊断鉴定试剂盒，包含权利要求2所述的单克隆抗体B1F5。

上述杂交瘤细胞株的制备方法，用spike-His作为抗原免疫小鼠；收集免疫后的小鼠的脾细胞，并将所述脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合得到融合细胞；采用HAT培养基对所述融合细胞进行选择培养；以及用spike-His蛋白抗原检测所述融合细胞的培养上清中的抗体，筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体B1F5的杂交瘤细胞B1F5。