[发明专利]鸭疫里氏杆菌phoR基因部分片段缺失弱毒株及应用

说明书

本发明属于动物细菌基因工程技术领域，具体涉及鸭疫里氏杆菌phoR基因部分片段缺失弱毒株及应用。所述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO:M2020432。该菌株缺失了鸭疫里氏杆菌云梦株（RA‑YM）phoP/phoR双组份信号系统中phoR基因的687bp，导致该菌株毒力显著下降，但仍保留有良好的免疫原性。本发明所得的phoR基因缺失株作为一株弱毒疫苗候选菌株，与传统灭活疫苗相比，其生产工艺简单，生产成本较低，通过给雏鸭免疫接种，能提供良好的免疫保护。

技术领域

本发明属于动物细菌基因工程技术领域，具体涉及鸭疫里氏杆菌phoR基因部分片段缺失弱毒株及应用。

背景技术

鸭传染性浆膜炎(infectious serositis of duck)又称鸭疫里氏杆菌病，是感染家鸭、家鹅、火鸡和多种家禽和野禽的一种急性、接触性、败血性传染病。临床诊断表现特征为困乏，眼与鼻腔有分泌物，绿色排泄物，共济失调和抽搐，慢性病例可呈现斜颈临诊症状。病理变化以纤维素性心包炎，肝周炎，气囊炎和脑膜炎为特征(郭玉璞1986)。早在1932年，美国纽约州的长岛地区有鸭传染性浆膜炎病例报道，随后在澳大利亚、英国、苏联等国家和地区蔓延。我国最早于1982年首次报道本病，目前在山东、四川、湖北、广东等养鸭省份均有鸭疫里氏杆菌感染的报道。该病发病率和致死率均较高，患病家禽的致死率高、生长缓慢、品质下降、饲料回报率低和养殖成本增加等，给养鸭业造成了巨大的经济损失，是目前危害养鸭业最为严重的细菌性传染病之一。

鸭疫里氏杆菌(Riemerellaanatipestifer，RA)是引起鸭传染性浆膜炎的病原，曾经被称为鸭疫巴氏杆菌(Pasteurella anatipestifer，PA)，1993年，Segers等根据鸭疫里氏杆菌DN A-核糖体RNA杂交分析、蛋白质和脂肪酸的组成以及表型特点，建议将其单独设立一个里氏杆菌属(Riemerella)得到认同。该菌为革兰阴性小杆菌，无芽胞，不能运动，有荚膜，病料中的菌体经瑞氏染色呈两极浓染。首次分离可将心、肝、脑、血等病料划线接种于TS A(胰蛋白胨大豆琼脂)或巧克力琼脂平板，在含5％-10％CO₂的环境中培养，在培养基内加入5％新生牛血清生长更好。生成的菌落表面光滑、稍有隆起、圆形，若继续培养菌落稍大，直径2mm左右。鸭疫里氏杆菌不能在普通琼脂培养基生长，也不能在麦康凯培养基上生长，在血液琼脂培养基上不形成溶血。

鸭疫里氏杆菌通常不发酵碳水化合物，但少数菌株能发酵果糖、麦芽糖、葡萄糖等产酸不产气。本菌不能分解蛋白胨中的色氨酸，因此生化试验不能产生吲哚，同时也不能分解含硫氨基酸产生硫化氢，但是有极少数菌株吲哚试验阳性。不还原硝酸盐，不水解淀粉，过氧化氢酶、接触酶、磷酸酶、磷胺酶、酯脂酶C8均为阳性，不利用枸橼酸盐。一般来说，鸭疫里氏杆菌对青霉素、链霉素、壮观霉素、红霉素等多种抗生素敏感，对卡那霉素、庆大霉素等有抵抗力。