[发明专利]一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法

说明书

本发明公开了一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，通过对枯草芽孢杆菌进行复合诱变后得到的诱变菌株与从患病玉米植株中提取的内生真菌的拮抗试验中选取菌种制备菌粉，该菌粉对玉米植物的病患具有较强的针对性，再将菌粉与多种微量元素混合制备成叶面肥，可以提高肥料的使用效率，减少肥料用量，避免土壤中原有微生物对本发明菌粉中菌种的抑制作用，EDTA螯合剂的加入可以保持叶面肥中微量元素养分的有效性，纳米二氧化硅的加入可以与叶面肥中其他的成分相结合，不仅可以延长叶面肥在叶面的滞留时间，还可以延长养分的作用时间达到缓控释肥的效果。

技术领域

本发明涉及微生物叶面肥技术领域，尤其涉及一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法。

背景技术

在农业生产中，植物病害会造成大量的经济损失，因此对病害的防治工作一直是农业科学研究的重中之重。玉米作物的锈病、纹枯病及叶斑病是玉米作物中较为常见的几种病害，现有的对这些病害的主要防治方法依旧是传统的农药防治，但是长时间大量的使用化学农药产生一系列的严重后果，例如，土壤中的农残超标严重，进而影响周边居民的身体健康，还有诸多人、畜农药中毒的案例；与此同时，植物病害的耐药性种群逐渐增加，造成农药的用量越来越大，进入恶性循环圈，而农业自然生态平衡系统遭到严重破坏。因此，越来越多的研究人员开始转向生物防治的方法，现有的生物防治主要是各种微生物菌肥，但是这些微生物菌肥多是施加于土壤中的，菌肥中的微生物容易受到土壤湿度、酸碱度、温度以及土壤中现存的微生物的影响，因此菌肥在作物根部的作用受到不同程度的抑制。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，包括以下步骤，

S1，分别选取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离、纯化、编号并保存；

S2，将枯草芽孢杆菌先后经紫外线与激光复合诱变后诱变菌群转接至牛肉膏斜面并初筛；

S3，使用步骤S2中得到初筛菌株与步骤S1中分离出的三种内生真菌进行拮抗试验，并根据拮抗试验结果从初筛菌株中选取至少一种最终菌株，将最终菌株扩大培养后制作成菌粉备用，当最终菌株大于一种时，每种菌株分别扩大培养并按等质量份比制备成菌粉；

S4，在去离子水中将步骤S3中制备的菌粉与EDTA、L-苯丙氨酸、多聚硼、KH₂PO₄、MnSO₄·7H₂O、Na₂SeO₄·10H₂O及FeSO₄·7H₂O混合；

S5，向步骤S4中制得的溶液中加入纳米二氧化硅，然后超声分散20～50min，即制得微生物叶面肥。

作为本发明技术的一种可选方案，患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离和纯化方法如下，剪取作物病害部位，用无菌水冲洗4次后再用次氯酸钠溶液进行消毒消毒，之后在无菌操作条件下将作物病害部位切成0.2cm×0.2cm的片状后置于PDA培养基上于28℃的恒温培养箱中进行培养，培养7d后使用孢子镜检挑选出病原菌，并在无菌环境下转接到试管斜面，于28℃培养箱中培养5～7d。

作为本发明技术的一种可选方案，步骤S2中复合诱变的方法为，枯草芽孢杆菌经激活扩大培养后使用无菌生理盐水调整悬液浓度为1.2×10⁸CFU/mL～3.5×10⁸CFU/mL后，取10mL菌悬液放入灭菌培养皿中，在磁力搅拌下置于20W的紫外灯下进行照射80s～200s；取紫外线诱变后的菌悬液1mL于无菌小试管中置于激光发射器进行照射，激光器的功率为10～30mW，照射时间为10～40min。

作为本发明技术的一种可选方案，初筛菌株与三种内生真菌之间的拮抗试验采用的是对峙培养法。